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研究背景:肿瘤的快速增长需要新生血管来提供氧气和养分,所以,肿瘤血管新生是肿瘤的一个基本特征。抗肿瘤血管生成疗法旨在通过抑制肿瘤血管来“饿死肿瘤”,并已广泛地用于非小细胞肺癌、结肠癌等实体肿瘤的治疗,但其临床疗效不佳,而且容易形成耐药性。最近的一些研究报道表明活化的免疫细胞也能够调节肿瘤血管生成。香菇多糖作为一种从香菇子实体中提取的多糖,具有增强免疫反应等多重生物活性,然而,香菇多糖对肿瘤血管生成的影响尚不清楚。目的:本论文旨在研究香菇多糖对肿瘤血管生成的影响及其机制。方法:第一,通过建立小鼠LAP0279肺癌和CT26结肠癌模型,使用不同剂量的香菇多糖进行治疗,寻找最佳的给药剂量;第二,在LAP0279肺癌和CT26结肠癌模型中,给药结束后收取肿瘤组织和制备单细胞悬液,利用流式细胞仪分析肿瘤浸润免疫细胞的组成与表型;第三,通过免疫组织化学检测肿瘤血管的密度与功能;第四,应用高通量荧光定量PCR检测与肿瘤血管生成相关因子的m RNA表达水平;第五,利用T细胞免疫缺陷型小鼠研究T淋巴细胞是否介导香菇多糖治疗对肿瘤血管的影响;第六,利用抗体中和体内IFN-γ,明确IFN-γ是否介导香菇多糖治疗对肿瘤生长和肿瘤血管的影响;第七,通过长期给药实验评估香菇多糖治疗的耐药性;最后,通过CCK-8和Tube formation实验检测香菇多糖对肿瘤细胞增殖与HUVEC血管内皮细胞管状结构形成的直接作用。结果:在LAP0279肺癌和CT26结肠癌两个模型中,低剂量的香菇多糖(1.0mg/kg,)比高剂量的香菇多糖(≥4.0 mg/kg)具有更好的抑制抗肿瘤生长的作用。香菇多糖治疗降低了肿瘤血管的功能,但不影响肿瘤血管的密度,对正常组织血管的形态与功能也没有影响。香菇多糖治疗增加了肿瘤坏死区域,这与其抑制肿瘤血管功能的结果相一致。实时荧光定量PCR分析结果显示香菇多糖治疗上调了ifnr、tnfa、cxcl9、timp1和tsp1等抗血管生成相关基因的表达。通过流式细胞仪分析,香菇多糖治疗增加了CD4+T细胞、CD8a+T细胞、自然杀伤性细胞、中性粒细胞的比例,而胞内IFN-γ染色分析表明香菇多糖治疗促进了IFN-γ在淋巴细胞、自然杀伤性细胞、中性粒细胞中的分泌,但减少了IFN-γ在肿瘤相关巨噬细胞中的分泌。在T细胞免疫缺陷型裸鼠上,香菇多糖治疗仍然抑制了LAP0279肺癌的生长,减少了肿瘤血管的密度和抑制了肿瘤血管的功能。体内中和IFN-γ后,香菇多糖治疗虽然仍保留了部分抑制肿瘤生长的作用,但其对肿瘤血管功能的影响被完全逆转。经长期香菇多糖治疗后,LAP0279肺癌持续变小,在45天时98%的肿瘤完全消失。体外实验结果显示香菇多糖对LAP0279肺癌细胞的增殖和对内皮细胞管状结构的形成没有直接的作用。结论:香菇多糖能够抑制LAP0279肺癌和CT26结肠癌的生长并降低肿瘤血管的功能;香菇多糖治疗通过增加IFN-γ的分泌来抑制肿瘤血管的功能,但这个作用不依赖于T淋巴细胞;此外,在LAP0279肺癌模型,香菇多糖长期治疗能够持续抑制肿瘤生长,而且不产生耐药性。香菇多糖有望成为一种新的可以长期使用的抗肿瘤血管生成药物。综上所述,香菇多糖可能通过多种不同的机制来影响肿瘤的生长,包括免疫系统的调节、促进IFN-γ的分泌和抑制肿瘤血管生成。