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环腺苷酸(3,5-cAMP,adenosine3,5-cyclicmonophosphate)作为生物体内普遍存在的第二信使不论在脊椎动物还是无脊椎动物中都发挥着重要的生理功能。建立快速灵敏的方法检测cAMP在生物体内的含量是一项非常有意义的研究。
实验建立了高效液相色谱—荧光检测器和高效液相色谱—质谱联用检测东亚飞蝗中央神经系统(CNS)内cAMP的含量的方法。cAMP用2-氯乙醛衍生化后会有较好的荧光响应,用含有TBAS的缓冲盐和甲醇做流动相,用高效液相色谱连接荧光检测器检测,方法的检测限(LOD)可达到1fmol/ml,精密度实验的RSD为2.2%。cAMP添加回收率实验,在10pmol/ml添加浓度下的回收率为100.3±0.6%,在0.1pmol/ml添加浓度下的回收率为88.5%±2.6%,定量限(LOQ)约为0.01pmol/ml。这种非放射性的检测方法适合检测昆虫等小生物样本体内痕量cAMP的含量。高效液相色谱—质谱联用检测cAMP的方法也得到了研究和发展。比较了离子阱质谱正负离子和单级多级模式对检测方法的影响,最后确定用DMHA作为离子对试剂,用离子阱质谱的多级负离子模式检测。
cAMP信号途径在生物信号的跨膜传输过程中发挥着重要作用。东亚飞蝗中央神经系统中含有章鱼胺(OA)受体,章鱼胺可以导致腺苷酸环化酶(ACE)活性增强从而使东亚飞蝗体内cAMP含量增加。通过测定生成的cAMP含量可以筛选对章鱼胺受体有活性的化合物作为新农药开发的先导化合物。因为人体不含章鱼胺受体,如果以章鱼胺受体为靶标开发新农药,可能会研发出新一代低毒高效的农药。本文设计了离体条件下东亚飞蝗中央神经系统中的腺苷酸环化酶反应。实验用这种高效液相色谱的检测方法测定了章鱼胺刺激前后东亚飞蝗中央神经系统中cAMP的含量的变化。不加OA刺激,蝗虫CNS中ACE反应的cAMP基础含量为0.417±0.009pmol/每只,用1mMOA刺激以后,cAMP的含量增加为1.505±0.003pmol/每只。实验为下一步开发新型低毒高效农药提供方法支持。