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目的:初步筛选靶向DPC4的miRNA,并探讨此niRNA对DPC4的转录后调控作用及分子机制。方法:结合基因芯片结果,利用生物信息学方法筛选出可能靶向DPC4基因的miRNA; Real-time PCR检测五种大肠癌细胞miRNA和DPC4基因的表达,western-blot检测(?)DPC4蛋白表达情况,选择miRNA/DPC4比值最大的细胞株作为后续转染对象;分别合成针对miR-190的mimics和inhibitor,瞬时导入所选出的大肠癌细胞株中,采用real-time PCR和western-blot检测DPC4的表达;使用psiCHECKTM-2载体,分别合成含miR-190可能靶向位点的DPC4/SMAD43’UTR片段的野生型及突变型双荧光光素酶报告基因,将]mimics-190和阴性对照分别与两种质粒组合共转染入工具细胞293T中,使用Promega检测系统对转染后细胞双荧光素酶活性检测,计算相对荧光素酶活性并进行分析。结果:使用预测软件TargetSca、microRNA.org和]mIRecords,预测(?)miR-190可能对DPC4mRNA3’UTR有直接的调控作用;荧光定量PCR分析了miR-190和DPC4基因的在五种大肠癌细胞系的表达情况,选取了表达较稳定的miR-190及miRNA/DPC4比值最大的大肠癌细胞株HT-29作为后续研究对象;使用real-time PCR和western-blot检测mimics和inhibitors瞬时转染后miR-190和DPC4的表达,结果显示miR-190mimics和inhibitor成功导入细胞,并且与各自阴性对照组相比,mimics组细胞DPC4蛋白表达水平下降,inhibitor组上升,而RNA水平无明显变化;双荧光素酶活性检测系统检测转染后细胞双荧光素酶活性,发现与阴性对照相比,miR-190可抑制(?)psiCHECK-2TM vector-3’UTR的荧光素酶报告基因活性。结论:1.DPC4基因是miRNA-190的靶基因;2.miRNA-190对大肠癌细胞HT-29的DPC4基因存在负性调控作用,并且可能是通过翻译抑制而非(?)mRNA降解来行使沉默功能的。图15幅,表5个,参考文献45篇