MicroRNA-190对人大肠癌细胞中DPC4基因转录后调控作用的初步研究

被引量 : 0次 | 上传用户:kmweiran
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:初步筛选靶向DPC4的miRNA,并探讨此niRNA对DPC4的转录后调控作用及分子机制。方法:结合基因芯片结果,利用生物信息学方法筛选出可能靶向DPC4基因的miRNA; Real-time PCR检测五种大肠癌细胞miRNA和DPC4基因的表达,western-blot检测(?)DPC4蛋白表达情况,选择miRNA/DPC4比值最大的细胞株作为后续转染对象;分别合成针对miR-190的mimics和inhibitor,瞬时导入所选出的大肠癌细胞株中,采用real-time PCR和western-blot检测DPC4的表达;使用psiCHECKTM-2载体,分别合成含miR-190可能靶向位点的DPC4/SMAD43’UTR片段的野生型及突变型双荧光光素酶报告基因,将]mimics-190和阴性对照分别与两种质粒组合共转染入工具细胞293T中,使用Promega检测系统对转染后细胞双荧光素酶活性检测,计算相对荧光素酶活性并进行分析。结果:使用预测软件TargetSca、microRNA.org和]mIRecords,预测(?)miR-190可能对DPC4mRNA3’UTR有直接的调控作用;荧光定量PCR分析了miR-190和DPC4基因的在五种大肠癌细胞系的表达情况,选取了表达较稳定的miR-190及miRNA/DPC4比值最大的大肠癌细胞株HT-29作为后续研究对象;使用real-time PCR和western-blot检测mimics和inhibitors瞬时转染后miR-190和DPC4的表达,结果显示miR-190mimics和inhibitor成功导入细胞,并且与各自阴性对照组相比,mimics组细胞DPC4蛋白表达水平下降,inhibitor组上升,而RNA水平无明显变化;双荧光素酶活性检测系统检测转染后细胞双荧光素酶活性,发现与阴性对照相比,miR-190可抑制(?)psiCHECK-2TM vector-3’UTR的荧光素酶报告基因活性。结论:1.DPC4基因是miRNA-190的靶基因;2.miRNA-190对大肠癌细胞HT-29的DPC4基因存在负性调控作用,并且可能是通过翻译抑制而非(?)mRNA降解来行使沉默功能的。图15幅,表5个,参考文献45篇
其他文献
目的含益生菌的酸奶联合经典的三联疗法对幽门螺杆菌(H.pylori)根除率的影响。方法选取200例幽门螺杆菌(H.pylori)感染以及经胃镜证实为十二指肠球部良性溃疡(duodenaluleer)或
<正>世界在悄然变化,中国的青春5G在领跑:大带宽、低延时、节能耗……中国数据中心一年耗电1200亿千瓦时,节省400亿千瓦时,相当于三峡大坝三分之一年供电量。万物互联,5G速率
论文研究了酵母菌、乳酸菌、黑曲霉、米曲霉和枯草芽孢杆菌等五种微生物固态发酵花生粕的工艺条件,并分别在最佳工艺条件下制备抗氧化肽,测定抗氧化肽的抗氧化活性。通过膜分离
在黑龙江省五常市安家-光辉优质水稻产区一带开展生态地球化学调查评价,主要通过土壤剖面调查工作,基本了查明了评价区内N、P、K等22种与农作物生长、人体健康及环境污染等有关
目的:通过采用中药塌渍治疗寒凝气滞型原发性痛经与应用少腹逐瘀颗粒对照,观察中药塌渍的有效性及安全性。并对近10余年来中、西医治疗研究进展进行总结,为此治疗方法临床推广及
河流是城市自然环境的重要构成因素之一,同时也是塑造城市景观的重要区域。随着可持续发展理论成为城市发展的指导方针,生态文明建设摆在了总体布局的高度,越来越多的城市在城市
研究背景和目的原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC;简称肝癌),在全世界范围内发病率排在第六位,每年全世界的发病是62.6万,我国每年死于肝癌约11万人,占全世界肝
研究背景妊娠期高血压疾病是妊娠期特发的全身性疾病,我国发病率9.4%,国外报道7%-12%,迄今为止仍然是母婴发病率及死亡率较高的主要原因。子痫前期(preeclampsia)是该疾病最
船舶柴油机排放的氮氧化物对海洋大气环境的影响日益严重,随着排放法规的逐步完善和日益严格,给船舶柴油机的发展带来了前所未有的挑战。柴油机喷油规律直接影响缸内混合气的形
研究背景和目的肿瘤是人类健康的最大危害因素之一,随着世界人口的增长和老龄化的加剧,全球癌症负担持续增加。据GLOBOCAN估计,2008年大约有1270万新发癌症病例和760万死亡病