IgA肾病是全球范围内最常见的原发性肾小球肾炎之一，本病起病隐匿，临床表现多样化，有30％-40％的患者会在10-25年内进展至终末期肾病，最终需要。肾脏替代治疗。因此，阐明IgAN的发病机理是重要的研究方向，对制定有效特异的治疗干预方案有积极的影响。 IgAN的始发因素是肾小球系膜区IgA沉积，其中主要是多聚IgAl沉积，伴或不伴IgG、C3沉积。近来研究发现，IgAN患者血清中及系膜区沉积的IgA1均存在O-连接糖基化异常，这种异常糖基化的结构使IgA1易于形成多聚体或与IgG形成免疫复合物，从而更易于在系膜区沉积，引起肾小球炎症和损伤。因而认为血清IgA1的增多及低糖基化的结构异常可能是IgAN的重要致病因素。目前低糖基化IgA1增多的机制尚不明确。 IgA1由多克隆活性B细胞生成，而B细胞分泌IgA1的过程受T细胞调控，因此T细胞免疫调节功能的紊乱可能导致失控的B细胞产生过量及异常的IgA1。以往研究发现IgAN中存在Th1/Th2的失衡，但对是Th1还是Th2占优势仍有争议，多数研究认为Th2占优势，但仍有部分研究持不同结论，而Th1/Th2失衡在IgAN中的作用亦尚未阐明。在大鼠动物模型中的研究发现，Th2类细胞因子不仅可促进B细胞产生IgA，其异常增加还可导致IgA分子N-糖基化的异常。但Th2对人IgA1分子O-连接糖基化异常的影响尚需进一步证实。 CD4+CD25high调节性T细胞是一个具有免疫抑制功能的T细胞亚群，对自身抗原和外来抗原引发的免疫反应均具有免疫调节作用，是机体维持免疫耐受的重要机制之一。叉头框蛋白3是其特异的功能调节蛋白，可在一定程度上反映CD4+CD25highTreg的水平和功能活性，被认为是CD4+CD25highTreg的特征性标志之一。近年来CD4+CD25highTreg在肿瘤、移植、感染以及自身免疫性疾病发病中的作用受到广泛关注，对肿瘤抗原逃逸、移植抗原耐受、感染病原体的慢性持续均起重要调节作用，但在IgAN中的作用鲜见报道。 本研究旨在观察调节性T细胞及辅助性T细胞在IgAN患者外周血中的变化，Treg等淋巴细胞在肾脏局部的浸润情况，并分析其与临床病理资料间的相关性，同时通过体外实验，观察Th2对IgAN患者外周单个核细胞产生IgAl及其糖基化的影响。通过这些研究初步探讨这两群T淋巴细胞在IgAN发病及进展机制中的作用，为临床治疗策略提供新的思路及理论基础。 第一部分调节性T细胞在人类IgA肾病中的变化及作用 第1章IgA肾病患者外周血调节性T细胞的变化 目的：观察IgAN患者外周血中CD4+CD25highTreg的变化，探讨其与临床病理的关系。 方法：2007年7月至2007年12月在中山大学附属第一医院。肾内科经肾活检确诊的IgAN患者，排外过敏性紫癜、系统性红斑狼疮、乙肝病毒相关性肾炎及肝硬化等继发性原因，1个月内未使用激素及免疫抑制剂；健康对照为健康献血者，无肾脏病史及肾脏病家族史。检测患者24小时尿蛋白定量、尿红细胞位相畸形红细胞计数、血尿酸、血IgA、血肌酐、血脂等临床指标，并根据较正的MDRD公式计算肾小球滤过率。观察肾组织形态学改变和免疫荧光表达等病理指标，并参照KatafuchiIntegralCalculusStandardforIgANephropathy对细胞增殖、小球硬化、新月体、间质细胞浸润、小管萎缩及间质纤维化进行半定量评分。 流式细胞术检测IgAN患者外周血中CD4+CD25highTreg的分布频率，并通过胞内染色技术检测FOXP3的表达，用Spearman或Pearson相关分析方法对CD4+CD25highTreg的分布变化与IgAN各项临床及病理指标进行相关性分析。 结果：IgAN患者外周血CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞的百分比高于健康对照者，两组间差异有统计学意义，且CD4+CD25highTreg高表达FOXP3。IgAN患者外周血CD4+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的百分比也较正常对照组明显升高，两组间差异有统计学意义。CD4+CD25highTreg的分布频率与血IgA水平呈正相关，与eGFR呈负相关，未发现与尿蛋白、血尿程度、血尿酸及各项病理指标有相关性。 小结：IgAN患者外周血中CD4+CD25highTreg增多，其分布频率与血IgA水平呈正相关，eGFR呈负相关。 第2章FOxP3在IgA肾病患者肾组织中的表达 目的：观察FOXP3、CD4、CD8、CD20在IgAN患者肾组织中的表达，探讨其与临床以及病理的关系。 方法：对50例IgAN患者肾组织石蜡切片进行免疫组化染色检测FOXP3、CD4、CD8、CD20的表达，利用电子图像分析系统测量小管间质面积，计算单位面积小管间质中淋巴细胞数目。收集临床指标，并对细胞增殖、小球硬化、新月体、小管萎缩及间质纤维化病理参数进行半定量评分。采用Spearman相关分析方法对各种淋巴细胞的表达数目与各项临床指标及病理参数进行相关性分析。 结果：IgAN患者肾组织中淋巴细胞浸润区可见FOXP3、CD4、CD8、CD20的表达，FOXP3在淋巴细胞胞核上表达，CD4、CD8、CD20在淋巴细胞胞膜及胞浆表达。这些表达阳性的淋巴细胞主要浸润于小管间质区，多呈灶状分布于硬化小球的周围，偶见小球内浸润。 结合临床病理资料分析，FOxP3+、CD4+、CD8+、CD20+细胞数均与肾穿时的eGFR呈负相关，与血尿酸呈正相关，与24小时尿蛋白定量呈正相关，与细胞增殖评分呈正相关，与小球硬化评分呈正相关，与间质纤维化呈正相关，与小管萎缩呈正相关。其中CD8+、CD20+细胞数与新月体形成有关。 小结：IgAN患者肾脏小管间质区可见FOXP3+、CD4+、CD8+、CD20+淋巴细胞浸润，其细胞数与肾穿时的eGFR呈负相关，与血尿酸、24小时尿蛋白定量、细胞增殖程度、小球硬化、间质纤维化、小管萎缩均呈正相关。 第二部分辅助性T细胞在人类IgA肾病中的变化及作用 第1章IgA肾病患者外周血辅助性T细胞亚群的变化 目的：观察IgAN患者外周血中Th1、Th2分布频率的变化，及Th1/Th2比值的变化，探讨其与临床病理的关系。 方法：2007年8月至2007年12月在中山大学附属第一医院肾内科经肾活检确诊的IgAN患者，排外过敏性紫癜、系统性红斑狼疮、乙肝病毒相关性肾炎及肝硬化等继发性原因，1个月内未使用激素及免疫抑制剂；健康对照为健康献血者，无肾脏病史及肾脏病家族史。收集患者各项临床指标，对细胞增殖、小球硬化、新月体、间质细胞浸润、小管萎缩及间质纤维化等病理参数进行半定量评分。 结果：IgAN患者外周血Th1占CD3+T细胞的百分比为14.04±4.11％，较正常对照组的16.25±6.16％减少，但两组间差异无统计学意义；Th2的百分比为2.57±0.72％，较正常对照组的1.81±1.10％增高，两组间差异有统计学意义。IgAN患者存在Th1/Th2失衡，Th1/Th2比值明显下降，两组间比较差异有统计学意义。IgAN患者外周血中Th2分布频率与血IgA水平呈正相关，与eGFR呈负相关，与其他指标无相关性。Th1及Th1/Th2比值与各项临床病理指标间均未发现相关性。 小结：IgAN患者体内存在Th1/Fh2失衡，表现为以Th2为优势，且Th2的分布频率与血IgA水平呈正相关，eGFR呈负相关。 第2章Th2对IgA肾病患者IgA1糖基化异常的影响 目的：体外观察Th2对IgAN患者外周单个核细胞分泌IgA1及其糖基化的影响，探讨Th2在IgAN免疫发病机制中的作用。 方法：Ficoll法分离IgAN患者及正常对照者的PBMC，部分通过免疫磁珠分选法去除Th2，分为PBMC、去除Th2的PBMC两组，每组均设空白对照，以美洲商陆丝裂原为淋巴细胞体外培养的刺激剂，体外刺激培养7天后，收集细胞上清，用ELISA方法检测IgA1的浓度。用凝集素ELISA法检测糖基化及唾液酸化水平，以IgA1与蚕豆凝集素的单位结合力代表半乳糖基化水平，与花生凝集素的单位结合力代表唾液酸化水平。两组问差别采用t检验。 结果：IgAN患者PBMC去除Th2后，分泌IgA1的平均浓度较未去除组明显下降，差别有统计学意义。IgAN患者及正常人PBMC去除Th2与未去除组比较，PBMC分泌的IgA1与VVL、PNA的单位结合力均无显著差别。 小结：Th2促进IgAN患者PBMC分泌IgA1增多，但对IgA1分子的半乳糖基化水平及唾液酸化水平无明显影响。 结论： 1.IgAN患者外周血中CD4+CD25highTreg增多，可能引起异常IgA1的清除障碍，参与IgAN的发病机制。 2.FOXP3+淋巴细胞在IgAN患者肾脏局部的浸润，可能与CD4+、CD8+、CD20+淋巴细胞一起参与IgAN的进展。 3.IgAN患者体内存在Th1/Th2失衡，以Th2为优势，可能通过促进IgA的产生分泌而参与IghN的发病。 4.体外实验证实Th2可促进IgAN患者PBMC分泌IgA1，但对IgA1的糖基化异常无直接作用。