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本文主要从以下几方面进行了论述: 第一部分合格献血员血浆HBV残留感染研究 目的:隐匿性HBV感染是指血清学检测HBsAg阴性,而血清和/或肝组织HBVDNA阳性的一种HBV感染状况,可伴有血清抗-HBs、抗-HBe和(或)抗-HBc阳性。其对感染者本身有多种危害,且可能造成输血后HBV感染。本研究调查了南京地区合格献血员中隐匿性HBV感染漏检率,以评估输血后HBV感染风险。 方法:于2007年2月至2008年4月随机收集间2972例合格献血员血浆,所有血浆经检测HBsAg,结果均为阴性,谷丙转氨酶正常。应用酶联免疫法检测HBV血清学标志物,应用酚/氯仿法提取血浆DNA,根据HBV DNA不同基因序列合成引物,用巢式PCR检测HBV DNA,对阳性标本PCR产物进行DNA序列分析,用NCBI服务器中的BLAST进行同源性检索,确定HBV基因型。 结果:本实验中巢式PCR检测灵敏度为20拷贝/ml,2972例合格献血员中共检测到隐匿性HBV感染者5例(0.13%),抗-HBs均为阴性,其中一例抗-HBc阳性。序列分析显示PCR所扩增片断与HBV DNA S区序列高度相似,与我国已知HBV的S基因同源性为95%。而5例的S区的碱基序列各不完全相同,与本实验室扩增的已知序列也不完全一致,说明不存在交叉污染情况。Blast分析结果显示,5例隐匿性HBV感染者HBV均为B基因型,且都没有发生S区“a”决定簇突变。 结论:南京地区合格献血员中存在隐匿性HBV感染,与HBV低流行区的0.01%以下比较,南京地区感染率较高,有引起输血后HBV感染的风险,因此,有必要对受血者进行前瞻性研究,明确输血后HBV感染的发生率。 第二部分普通成年人群隐匿性乙型肝炎病毒感染情况分析 目的:调查普通成年人群隐匿性HBV感染率。 方法:收集普通成年人血清1440份,ELISA检测HBV血清学标志物,用HBVDNA不同区域引物的巢式PCR检测HBV DNA,对阳性标本进行DNA序列分析,并确定HBV基因型。 结果:1440份血清中,HBsAg阳性70例(4.86%);HBsAg阴性的1370份血清中,3例(0.21%)至少2组不同特异性引物巢式PCR显示HBV DNA阳性。其DNA序列与基因库中已知HBV序列同源,证实了PCR产物的特异性,而各HBV DNA序列又不完全相同,排除了因污染造成的假阳性。3例隐匿性HBV感染中2例为基因型B型,另1例为C型。 结论:普通成年人群存在隐匿性HBV感染。输血和器官移植时,仅以血清学标志物作为筛查HBV的手段,可能会引起HBV的传播。尽管隐匿性HBV感染对人体的确切影响仍不明确,但需对此类人群进行随访。