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病毒性出血热(Viral hemorrhagic fevers, VHFs)常由4种科的心A病毒引起,均以发热和出血为主要症状。目前,大多数病毒性出血热无有效疫苗及治疗药物。克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF)是一种由克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)引起经蜱传播的病毒性疾病,在非洲,亚洲,欧洲南部,中东的30多个国家都有感染病例的报道。裂谷热(Rift Valley fever, RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus, RVF V)引起一种人畜共患病。该病在非洲、中东及也门地区流行,危害人身安全和畜牧业发展。拉沙热(Lassa fever,LF)是一种由拉沙病毒(Lassa fever virus, LAV)引起的病毒性出血热,在西非呈地方性流行。由于该病传染性强,在其他欧美国家也有输入性病例报道。目前,病毒分离、血清学试验、分子生物学检测是VHFs的主要实验室检测方法。病毒分离,费时、费力,不适宜在疫区外开展。血清学检测方法可能产生交叉反应且需要注意样本的采集时间。基因芯片技术因具备高通量、微量性、自动化的优点,在病原体检测上有巨大潜力。然而,对实验条件及设备要求较高限制了该技术的广泛应用。近年来,以纳米金标记的基因芯片因具备稳定、无污染、廉价的特点正逐渐取代以荧光素标记的基因芯片在DNA检测中大量被使用。本研究的目的是建立CCHFV、RVFV和LAV的荧光基因芯片和可视化基因芯片检测方法。分别以CCHFV和RVFV的S基因,LAV的部分GPC基因和NP基因,设计3对引物与6条寡核苷酸探针,下游引物分别修饰荧光素和生物素。以pMD18T-simple为载体,构建含三种病毒保守序列的重组质粒pMD-CCHFV、pMD-RVFV、pMD-LAV。以人工合成的保守基因序列为模板体外转录成病毒RNA作为检测样本。使用多重PCR对目的片段进行扩增及标记。通过荧光显微镜获取荧光基因芯片杂交结果。标记生物素的扩增产物与基因芯片杂交后,加入链霉亲和素标记的纳米金,形成生物素-链霉亲和素-纳米金复合物,再通过银增强试验对信号进行再次放大。最后通过特异性试验、灵敏性试验及重复性试验对两种基因芯片进行评价。本研究成功建立了三种出血热病毒的荧光基因芯片和可视化基因芯片检测方法,且特异性和重复性良好。运用荧光基因芯片可检测出2.1×10-4ng/ml的pMD-CCHFV扩增产物,2.82×10-2ng/ml的pMD-RVFV扩增产物,1.73×10-4ng/ml的pMD-LAV扩增产物。运用可视化基因芯片检测出2.1×10-3pg/ml的pMD-CCHFV扩增产物,2.82×10-1 pg/ml的pMD-RVFV扩增产物,1.73×10-2pg/ml的pMD-LAV扩增产物。相比荧光基因芯片,可视化基因芯片的灵敏度分别提高了100倍(CCHFV),100倍(RVFV),10倍(LAV)。结果表明,本研究所建立的两种基因芯片检特异性高、敏感性强,可用于三种病毒的快速检测与甄别。