【摘 要】
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第一部分Au纳米复合粒子的制备细胞相容性研究目的:设计制备金(Au)纳米复合粒子,描述其形貌、成分及理化性质,评价其生物相容性。方法:制备Au纳米复合粒子,通过透射式电子显微镜(TEM)观察金纳米复合粒子的形貌并使用能量色散X射线分析仪确定样品的元素组成,采用X射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱仪(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)、表面zeta电位等方法分析金纳米复合粒子理化性质。通
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第一部分Au纳米复合粒子的制备细胞相容性研究目的:设计制备金(Au)纳米复合粒子,描述其形貌、成分及理化性质,评价其生物相容性。方法:制备Au纳米复合粒子,通过透射式电子显微镜(TEM)观察金纳米复合粒子的形貌并使用能量色散X射线分析仪确定样品的元素组成,采用X射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱仪(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)、表面zeta电位等方法分析金纳米复合粒子理化性质。通过CCK8验证金纳米复合粒子的细胞相容性。结果:表征分析所示Au纳米复合粒子制备成功。Au纳米复合粒子对细胞的活性和增殖无明显影响。结论:Au纳米复合粒子成功制备,具有良好的细胞相容性。第二部分Au-HA纳米复合粒子诱导成骨分化的研究目的:探究Au-HA纳米复合粒子对hMSCs成骨分化的影响以及潜在的协同效应机制。方法:通过TEM观察复合纳米粒子的细胞内吞效应。在评估成骨分化方面,通过碱性磷酸酶(ALP)的活性测试及染色、茜素红(ARS)染色、Real-Time PCT检测Au-HA纳米复合粒子对hMSCs成骨分化和成骨相关基因表达的影响。最后通过Real-Time PCR和Western blot探究Au-HA诱导hMSCs成骨分化的相关分子机制。结果:Au-HA纳米复合粒子展示出良好的细胞相容性并且能够通过正常内吞途径进入细胞。与对照组相比,Au-HA能够提高ALP的表达、增加钙结节矿化并且提高成骨相关基因的表达。此外,结合金纳米的复合粒子能够激活Wnt/β-catenin信号通路,这也许是Au-HA发挥协同效应诱导hMSCs成骨分化的潜在分子机制。结论:Au-HA复合纳米粒子发挥协同效应促进hMSCs成骨分化,Wnt/β-catenin信号通路可能是其相关的分子机制。第三部分Au-MSNs纳米复合粒子调剂免疫及促进骨再生的研究目的:探究Au-MSNs纳米复合粒子对巨噬细胞的免疫调节效应,以及进一步对骨再生的影响。方法:运用Real-Time PCR和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Au-MSNs对RAW264.7的细胞极化效应。通过免疫荧光染色观察Au-MSNs对成骨前体细胞(MC3T3)形态及活性的影响。进一步,使用Real-Time PCT、Western blot、ALP染色以及ARS染色评估Au-MSNs的免疫调节效应对MC3T3成骨分化的影响。最后,将装载Au-MSNs的生物支架植入大鼠颅骨缺损部位,通过HE染色、Masson染色以及免疫组化(Col1)评估Au-MSNs对体内骨再生的效应。结果:与对照组相比,一定浓度范围内的Au-MSNs对巨噬细胞活性无抑制作用。PCR和ELISA结果显示Au-MSNs能够诱导巨噬细胞向M2极化,且促进其成骨相关因子(BMP2、TGF-β、VEGF)的释放。同时,免疫荧光染色观察到Au-MSNs生物相容性良好,对MC3T3形态及活性无明显影响。进一步,PCR、Western blot、ALP和ARS结果表明Au-MSNs能够通过巨噬细胞免疫调节效应提高MC3T3的成骨分化能力。最后,体内实验观察到Au-MSNs处理的大鼠颅骨缺损模型中形成了更多的新生骨。结论:Au-MSNs能够诱导M2巨噬细胞极化并释放成骨相关因子,进一步促进MC3T3成骨分化,促进新骨形成。
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