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冬虫夏草为名贵中药材,味甘性平,有保肺肾、补精髓、化痰止劳咳,以及调节免疫功能、增强人体对多种疾病抵抗力的功效.但是天然虫草受自然条件限制,产量有限,满足不了国内外日益增长的需要,已成为稀世之珍,因而货源奇缺,供不应求,价格昂贵.目前国内对冬虫夏草的研究,主要以分析天然虫草和虫草菌丝体的腺苷、D-甘露醇和虫草多糖的含量,从自然环境分离冬虫夏草的无性型菌株,以及无性型菌株深层发酵的培养基和培养条件的研究居多.该课题以提高冬虫夏草菌丝体的主要活性化学成分腺苷的含量为目的,对冬虫夏草Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.菌株CS-JS进行了菌种选育和发酵的研究,并初步建立了冬虫夏草发酵菌丝体的毛细管电泳指纹图谱,为冬虫夏草菌丝体产品的研发和产品的鉴别打下了基础.实验建立了无性型冬虫夏草(Cordyceps sinesis(Berk.)Sacc.)CS-JS菌株菌丝体的两种活性成分D-甘露醇和腺苷的含量测定方法.用80°C水浴40min制备人工虫草菌丝体D-甘露醇样品,比色法测定D-甘露醇,在10μg/ml~50μg/ml内呈良好的线性关系(r=0.9999),RSD为1.47％,平均回收率为104.08％,该法简便准确,重现性好.用超声处理的方法制备虫草菌丝体腺苷样品,HPLC测定其含量,腺苷保留时间为7.6min,在0.016mg/ml-O.24mg/ml浓度范围内,呈良好的线性关系(r=0.9999),RSD=0.77％.通过酶解细胞壁的方法,优化了冬虫夏草(Cordyceps sinesis(Berk.) Sacc.)CS-JS菌丝体的原生质体制备和再生条件:6天左右菌龄的菌丝体,1％蜗牛酶和1％纤维素酶的酶组合,在pH6.4的甘露醇稳渗环境,36°(C酶解1.5h,可获得原生质体2.04×10<9>个/ml.再生培养基为RM3时,再生率为0.091％.以腺苷的高产为主要筛选目标,D-甘露醇和多糖为辅助筛选指标,选取120秒为诱变时间进行原生质体诱变.应用8-AG筛选AMP脱氨酶缺陷型或低活性的突变株的办法,筛选到腺苷含量提高8.24倍的诱变株CS-JS-16.该筛选模型首次应用于虫草腺苷高产菌株的筛选,可提高筛选效率.通过对培养条件的研究,确定了冬虫夏草(Cordyceps sinesis(Berk.) Sacc.)CS-JS-16最佳发酵培养基是:蛋白胨0.75％、葡萄糖1.5％、pH6.3、MgSO<,4>0.15％、KH<,2>PO<,4>0.2％.发酵6天后,最大发酵量是0.1746g/10ml,最大AR含量是1.0826mg/g.CS-JS-16菌丝体急性毒理学实验表明,昆明种小鼠最大耐受剂量为26.4g/Kg.应用毛细管电泳的方法,比较了冬虫夏草(Cordyceps sinesis(Berk.) Sacc.)同一菌系和不同菌系菌丝体的毛细管电泳图谱,通过分析共有特征峰、重叠率以及特征峰的相对峰面积范围,建立了冬虫夏草无性型菌株的毛细管电泳指纹图谱.冬虫夏草CS-JS菌系共有特征峰7个,特征峰的重叠率大于70％,特征峰的相对峰面积范围小于10％.