1.研究目的: 外伤性癫痫(Post traumatlc epilepsy；PTE)是继发于颅脑损伤后引起的癫痫发作，是颅脑损伤后一种常见的严重并发症，可发生于颅脑外伤后的任何时间。既可以在脑外伤后即刻发作，也可以于脑外伤痊愈后数年发作。由于癫痫发病距外伤时间长短不一，部分案例缺乏明显外伤性影像学改变，客观鉴定依据不足，在检案中被鉴定人所患癫痫与外伤的关系常引发争议，成为法医鉴定工作中的难点之一；外伤性癫痫也是临床久治不愈反复发作的疑难疾病，目前对它的发病机制也不是很清楚。因此有必要对此进行深入的研究，以获得相关的实验数据，为法医学鉴定提供依据，也为临床治疗提供理论基础。 Bcl-2基因族和caspase基因族是近年相继发现的两类与细胞凋亡密切相关的基因族，它们在细胞凋亡发生的不同阶段起不同的调控作用。大量的动物实验和临床研究已经证实，创伤性脑损伤(Traumatic brain injury；TBI)后存在细胞凋亡基因的表达，特别在bcl-2基因族中bcl-2和caspase基因族中caspase-10基因的表达。外伤性癫痫是由颅脑外伤后发展而来，既然脑外伤后存在细胞凋亡基因bcl-2和caspase-10的表达，是否外伤性癫痫也存在这些基因的表达，以及表达的程度如何，目前有关细胞凋亡基因bcl-2和caspase-10在人体外伤性癫痫灶皮质神经元中的表达的研究仍属于空白。因此本实验，运用RT—PCR、western blot、免疫组化和荧光免疫组化等方法探索细胞凋亡基因bcl-2和caspase-10在原发性癫痫和外伤性癫痫病人脑组织标本中的表达情况，并将其与正常脑组织中的表达情况进行统 计学比较和分析，探讨其法医学意义和临床意义，以期为阐明外伤性癫痫的发病机制，为外伤性癫痫法医鉴定提供新的依据，也为临床治疗外伤性癫痫提供理论基础和支持。 2.研究方法: 本实验共分为三组：外伤性癫痫组(脑外伤后继发癫痫患者)15例、非外伤性癫痫组(非外伤性癫痫患者)15例、空白对照组(交通事故死亡者)15例。 2.1对所收集的皮质样本均进HE染色，镜下观察各组标本的形态学改变； 2.2运用RT—PCR技术从分子水平比较各实验组凋亡基因表达的水平； 2.3用免疫组织化学染色技术和荧光免疫组化染色技术从蛋白水平定性观察各实验组凋亡基因对应的蛋白表达水平； 2.4运用westernblot技术量化凋亡基因对应的蛋白在各实验组中的表达量，比较二者在外伤性癫痫组、非外伤性癫痫组和对照组中表达量的变化及差异。 3.研究结果: 3.1HE染色结果外伤性癫痫组、非外伤性癫痫组所有标本均显示不同程度的神经细胞核固缩，胞体缩小变形，尼氏小体消失，胞浆变性、肿胀甚至呈空泡状，染色呈深伊红色，并可见嗜神经细胞现象(坏死的神经细胞被增生的小胶质细胞围绕吞噬)及小胶质细胞结节。空白对照组神经元胞浆水肿，细胞核染色呈深伊红色。 3.2RT—PCR结果1)Bcl—2：Bcl—2mRNA在外伤性癫痫组表达水平明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Bcl—2mRNA在非外伤性癫痫组表达水平明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Bcl—2mRNA在非外伤性癫痫组明显高于外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 2)Caspase-10：Caspase-10mRNA在外伤性癫痫组表达水平明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Caspase-10mRNA在非外伤性癫痫组表达水平明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Caspase-10mRNA在外伤性癫痫组明显高于非外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 3.3免疫组化染色结果1)Bcl—2：Bcl—2主要在外伤性癫痫组与非外伤性癫痫组癫痫灶皮质的神经元胞浆中表达，对照组中未见明显表达；与外伤性癫痫组比较，非外伤性癫痫组表达显著增高，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 2)Caspase-10：Caspase-10主要在外伤性癫痫组与非外伤性癫痫组癫痫灶皮质的神经元胞浆中表达，对照组中未见明显表达；与非外伤性癫痫组比较，外伤性癫痫组caspase-10表达显著增高，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 3.4荧光免疫组化染色结果1)Bcl—2：Bcl—2以CY3红色荧光标记，Bcl—2在外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；在非外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；在非外伤性癫痫组表达明显高于外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 2)Caspase-10：Caspase-10以FITC绿色荧光标记，Caspase-10在外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；在非外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；在外伤性癫痫组表达明显高于非外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 3.5westernblot结果1)Bcl—2：Bcl—2在外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Bcl—2在非外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Bcl—2在非外伤性癫痫组表达明显高于外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 2)Caspase-10：Caspase-10在外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Caspase-10在非外伤性癫痫组表达明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)；Caspase-10在外伤性癫痫组表达明显高于非外伤性癫痫组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。 4.研究结论: 1、在外伤性癫痫灶中，发现有神经元凋亡和胶质细胞大量增生的现象。 2、在外伤性癫痫灶中，抑制凋亡的bcl—2基因及其蛋白存在着低表达和促进凋亡的caspase-10基因及其蛋白存在着高低表达，caspase-10、bcl—2基因参与外伤性癫痫的发病过程，神经元凋亡可能是导致外伤性癫痫发病原因之一。 3、在外伤性癫痫的法医学鉴定有争议时，这些差异表达的基因及其蛋白有助于为外伤性癫痫的法医学鉴定提供实验数据和理论基础。 4、本研究为阐明外伤性癫痫发病机制、临床治疗外伤性癫痫病人提供了理论基础。