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血清4型禽腺病毒（FAdV-4）对3～6周龄肉鸡具有高致病性,感染通常引起心包积水-肝炎综合征（HHS）,该病2015年起在我国河南、山东和广西等地陆续暴发,给养禽业造成惨重的经济损失。Toll样受体（TLRs）是一种典型的模式识别受体,当有病原入侵机体,它就立即识别病原保守的相关分子模式,随后诱导一系列的级联反应,引起I型干扰素和炎性因子等表达,以抵抗和清除病原。已有研究证实,病原入侵机体后TLRs mRNA表达量会发生变化。监测TLRs表达量变化,有助于阐明病原的致病机理。但有关FAdV-4感染对TLRs mRNA表达量的影响欠缺系统研究。因此本研究将FAdV-4广西分离株（FAdV-4-GX2019-010）感染鸡肝癌细胞（LMH）和SPF鸡,检测10种禽源TLRs mRNA表达量的动态变化,随后继续检测FAdV-4主要编码蛋白（fiber1、penton、22K、52K）对10种TLRs及8种信号通路相关分子mRNA表达量的影响,为进一步研究FAdV-4的致病机理奠定基础。具体研究内容如下:一、FAdV-4感染LMH细胞对Toll样受体mRNA转录水平的影响将FAdV-4-GX2019-010以最佳的MOI感染LMH细胞,收集感染后12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、84 h、96 h、108 h和120 h的细胞样品,利用荧光定量PCR检测病毒增殖情况和10种禽源TLRs mRNA表达量变化。结果显示,LMH细胞在72 h出现变亮变圆和脱落等典型病变,病毒在12～48 h快速增殖,随后缓慢增殖,到96 h达到高峰。10种禽源TLRs mRNA表达量在感染后72～120 h均出现不同程度上调,其中chTLR21上调倍数最大（56.71倍）,其次是chTLR4、chTLR1a、chTLR1b,提示它们是体外细胞抵抗FAdV-4感染的重要受体。二、FAdV-4感染SPF鸡对组织器官中Toll样受体mRNA转录水平的影响通过肌肉注射将FAdV-4-GX2019-010感染SPF鸡,感染后1、3、5、7和10天解剖观察组织病变,采集心脏、肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊,利用荧光定量PCR检测各组织中的病毒载量和10种禽源TLRs mRNA表达量变化。结果显示,感染组鸡出现心包积液和肝脏肿大黄染等特征性剖检病变。肝脏中病毒载量最高,在第5天达到107.65copies/μL,其次是心脏、脾脏、法氏囊和胸腺。感染后5～7天,10种禽源TLRs mRNA表达量在5种组织出现不同程度上调:肝脏有9种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大（31.86倍）,其次是chTLR2a、chTLR3等;心脏有5种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大（30.26倍）,其次是chTLR15、chTLR1b等;脾脏有4种TLRs上调,其中chTLR21上调倍数最大（8.92倍）,其次是chTLR4、chTLR3等;胸腺有9种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大（10.37倍）,其次是chTLR21、chTLR3等;法氏囊有8种TLRs上调,其中chTLR7上调倍数最大（11.49倍）,其次是chTLR4、chTLR21等。提示chTLR4、chTLR7、chTLR21是体内参与抵抗FAdV-4感染的重要受体。三、FAdV-4主要编码蛋白对Toll样受体及信号通路相关分子mRNA转录水平的影响将FAdV-4-GX2019-010的编码蛋白fiber1、penton、22K和52K克隆到真核表达载体p EF1α-HA上,经间接免疫荧光和Western blot验证目的蛋白成功表达后,将其转染LMH细胞,转染后24 h接种FAdV-4-GX2019-010,继续培养48 h收集细胞样品,利用荧光定量PCR检测TLRs及信号通路相关分子的mRNA表达量变化。结果显示,fiber1蛋白表达后chTLR1b、chTLR3、chTLR7和chTLR21显著上调,通路相关分子MyD88、IRF3/7和IFN-β也显著上调;penton蛋白表达后chTLR21显著上调,通路相关分子NF-κB和IL-1β显著下调;而22K和52K蛋白表达后对TLRs及信号通路相关分子的mRNA表达量变化不显著。提示编码蛋白fiber1和penton在FAdV-4致病过程中发挥重要作用。综上,FAdV-4-GX2019-010感染LMH细胞和SPF鸡后chTLR4和chTLR21上调倍数均较大,提示它们是机体抵抗FAdV-4感染的重要受体。进一步发现编码蛋白fiber1能促进chTLR1b、chTLR3、chTLR7和chTLR21介导的信号通路,上调MyD88、IRF3/7和IFN-β表达;penton蛋白能影响chTLR21介导的信号通路,抑制NF-κB和IL-1β表达。提示fiber1蛋白和penton蛋白在FAdV-4致病过程中发挥重要作用。本研究从体内和体外分析了FAdV-4-GX2019-010感染对10种禽源TLRs mRNA表达量的影响,并在LMH细胞中表达4种FAdV-4主要编码蛋白（fiber1、penton、22K和52K）,检测其对TLRs及通路相关分子mRNA表达量的影响,为进一步研究FAdV-4的致病机理奠定基础。