单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）是人类病毒性疾病的常见病原体之一，含有HSV-1和HSV-2两个血清型。HSV-1主要感染腰部以上、生殖器以外的皮肤、粘膜和神经系统，而HSV-2则主要造成腰部以下的皮肤疱疹，尤其是生殖器疱疹。HSV-2极易感染与传播，但是清除病毒十分困难，根源在于HSV-2具有嗜神经潜伏性。病毒可在人的骶尾神经节内建立终生潜伏，并可因各种非特异性刺激活化而导致相关临床症状的复发。但目前对单纯疱疹病毒潜伏复发的机制尚不明确，给临床上彻底清除病毒造成了巨大困难。　　 潜伏相关转录体（latency-associated transcript，LAT）是HSV在潜伏期间唯一大量存在和被转录的基因，被认为在HSV潜伏的建立、维持及再激活中至关重要。但对于LAT的作用机理，目前已提出了各种假说，但还没有形成统一的认识。HSV-2 LAT包括9．0kb的非主要LAT和2．2kb的主要LAT，目前有研究表明主要LAT的蛋白读码框能编码一个与病毒立即早期蛋白ICP0具有类似功能的蛋白，在病毒潜伏激活过程中起了很重要的作用。　　 本研究以成功构建的pVAX-LAT重组载体为模板，PCR扩增获得HSV-2LAT基因ORF序列，PCR产物和pcDNA6/myc-His B质粒用KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接，产物转化大肠杆菌Top10，经抗性筛选后获得重组质粒pcDNA-ORF，双酶切及测序鉴定重组质粒。重组质粒测定浓度后，在脂质体介导下转染Vero细胞，用RT-PCR和Western blot鉴定LAT基因ORF的表达情况。结果表明，目的基因已在Vero细胞中获得了表达。在此基础上，用已经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切和测序鉴定的pcDNA6/myc-his-EGFP B质粒转染Vero细胞，结果绿色荧光得到了很好的表达，转染效率良好。最后，设计3对针对LAT基因ORF序列的siRNA，用化学法合成，再将siRNA和质粒pcDNA-ORF用脂质体法共转染Vero细胞，以RT-PCR筛选最佳沉默效率的siRNA。　　 本研究成功构建了pcDNA-ORF重组真核表达质粒，并在Vero细胞内表达，然后筛选得到了2对有效沉默LAT基因的siRNA，为利用RNA干扰技术研究LAT介导的单纯疱疹病毒潜伏及激活感染机制奠定了良好的实验基础。