目的：　　 1、检测线粒体DNAcomplexⅣ突变在甲状腺患者中的发生情况。　　 2、研究分析线粒体DNAcomplexⅣ与甲状腺肿瘤临床资料之间的关系。　　 3、探讨线粒体DNAcomplexⅣ突变在甲状腺肿瘤发生发展中的作用。　　 方法：　　 1、标本的收集：随机收集温州地区甲状腺肿瘤患者的冰冻病理切片，及其外周静脉血，同时收集其临床资料。选取60例甲状腺恶性肿瘤（甲状腺乳头状癌59例和甲状腺滤泡状癌1例）和20例甲状腺良性肿瘤（腺瘤型结节性甲状腺肿1例和甲状腺腺瘤19例）进行实验。　　 2、全基因组DNA的提取：光学显微镜下观察病理冰冻组织切片，区分肿瘤组织和肿瘤旁正常组织，分别刮取肿瘤组织和肿瘤旁正常组织。用试剂盒法提取血液标本的全基因组DNA，按酚-氯仿法提取肿瘤组织和肿瘤旁组织的全基因组DNA。　　 3、PCR扩增：设计7对互相交叉的引物对线粒体DNAcomplexⅣ进行PCR扩增，PCR产物直接进行测序。　　 4、数据分析：以患者自身的外周静脉血序列为对照，应用软件CodoncodeAligner对测序结果进行线粒体DNAcomplexⅣ突变情况分析。进一步分析氨基酸改变并运用生物软件进行保守性分析，借助蛋白质数据库对二级结构进行预测，探讨complexv突变致瘤的分子机制。　　 5、统计分析：结合患者的临床资料，通过统计学方法分析来探讨线粒体DNAcomplexⅣ突变与患者的临床病理资料之间的关系。　　 结果：　　 1、本研究在mtDNAcomplexⅣ亚基上共检测到5个突变，其中2个为同质性突变(40％)，3个为异质性突变(60％)。其中观察到3个突变位点G6321A、G6789A和A7718G从血液到肿瘤组织的异质性变化，即由野生型向突变型的转变过程。　　 2、本研究样本例数和地域范围内，在60例甲状腺恶性肿瘤患者中的5例(8.33％)检测到突变；在20例甲状腺良性肿瘤患者中的0例(0％)患者检测到突变。对其进行统计学分析，结果p值＞0.05，认为两组间突变率无统计学差异。　　 3、5个突变位点中，3个为无义突变(包括G6321A、G6708A和G6789A)，2个为错义突变。2个错义突变均引起氨基酸极性改变，对其二级结构进行预测，没有引起跨膜螺旋的改变。无义突变引起了其编码多肽链的缩短，二级结果预测的结果显示跨膜螺旋的数目减少。　　 4、本研究突变位点在complexⅣ上的分布情况为COX1基因4个、COX2基因1个，而碱基改变5个均为G-A。　　 5、本研究在complexⅣ上共发现65个多态性位点，其中有11个是未报道的。其中64个位点(98.46％)为碱基之间的转换，2个(3.03％)为碱基之间的颠换(包括1个C-A，1个T-A)。　　 6、对mtDNAcomplexⅣ突变与甲状腺肿瘤患者临床资料进行相关性分析，结果发现甲状腺恶性肿瘤患者中complexⅣ突变更容易发生在年轻患者(P值为0.036)以及男性患者中(P值为0.03)。　　 结论：　　 1、观察到3个突变位点(G6321A、G6789A和A7718G)从血液到肿瘤旁组织，再到肿瘤组织的异质性变化，即由野生型向突变型的转变过程。　　 2、在本研究样本例数（包括60例恶性和20例良性甲状腺肿瘤）和地域（温州地区）范围内，mtDNAcomplexⅣ突变在恶性肿瘤组高于良性肿瘤组，突变率无统计学差异（p值＞0.05），但无义突变G6321A、G6708A和G6789A的二级结构预测结果显示蛋白质二级结构发生改变，推测其可能在甲状腺肿瘤的发生发展中起一定作用。　　 3、本研究范围内mtDNAcomplexⅣ突变与甲状腺恶性肿瘤患者的性别、年龄相关。mtDNAcomplexⅣ突变更容易发生在年轻患者以及男性患者中。