小球藻病毒的分离提纯及其几丁质酶基因的克隆

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以小球藻NC64A株系为寄主,从14个省市采集的数百个水样中普遍得到了病毒分离物,初步表明小球藻病毒在我国的分布是十分广泛的。其中富营养化的水体中小球藻病毒滴度普遍较高,而在山泉等含有机质较少的水体中病毒滴度较低。病毒在水体中的含量随季节的变化而变化,夏季较高,冬季较低。研究还表明小球藻病毒对宿主有很强的专一性。对病毒分离物中的11株病毒进行了较为详细的研究,发现这些病毒具有许多相同的性质,如均为球形多角体,基因组为300kbp左右的dsDNA。由于小球藻病毒与害主的关系具有严格的专一性,所以这11个病毒分离物均属于NC64A小球藻病毒。但对病毒生物学性质的研究表明,这些病毒间存在着差异:如11个病毒分离物的大小不同;基因组DNA限制性酶切图谱(除BJ-1B和BJ-2C相同外)不同等。所以,它们应属于同一类病毒的不同的病毒株系。 用3%~10%的PEG8000加3%~7%的NaCl沉淀小球藻病毒FJ-1。其中以7%的PEG和4%的NaCl沉淀效果最好,而且不影响FJ-1侵染活力及其形态特征。但PEG的沉淀效率要低于超速离心的效率,前者病毒的收率为21%,后者病毒的收率为36%。 本文还根据文献报道设计特异性的寡核苷酸引物,以PBCV-1基因组DNA为模板,PCR扩增小球藻病毒几丁质酶基因A181并将A181 DNA克隆到pUC19的EcoRI、SalI位点中,得到克隆载体pUC181,通过其四个亚克隆的构建完成了该基因的全序列测定。
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