【摘 要】
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四逆散始载于中医经典著作《伤寒论》,主治阳郁厥逆证和肝脾不和证,具有透邪解郁,疏肝理气的作用。四逆散由柴胡、白芍、枳实和炙甘草四味中药材饮片按照1:1:1:1的比例构成,其中柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinese DC.的干燥根;白芍为毛莨科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根;枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果;以及甘
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四逆散始载于中医经典著作《伤寒论》,主治阳郁厥逆证和肝脾不和证,具有透邪解郁,疏肝理气的作用。四逆散由柴胡、白芍、枳实和炙甘草四味中药材饮片按照1:1:1:1的比例构成,其中柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinese DC.的干燥根;白芍为毛莨科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根;枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果;以及甘草味豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎。现代临床研究表明,四逆散或其加减类方配伍用于治疗各类胃肠道疾病和肝胆疾病等病症。如今,尽管已有研究对四逆散的化学物质组成进行不同层次的分析,但多为推理鉴定,缺乏实证,以至制约其药效物质基础及其机理研究,进而影响临床对该方剂的精准开发与转化应用。基于此,本研究优化建立基于超高效液相-质谱联用系统的中药化学物质组分析与表征方法,经过从样品制备,色谱分离,质谱定性和定量表征等多参数系统优化,稳定采集四逆散化学物质组表征数据。基于多批次四逆散水提物和醇提物供试样品,首先进行多维度的定性辨识,既结合数据库和文献检索,又和样本二级质谱推理与匹配,共圈定93个化学特征峰,并给出可能的化合物名称标识;其次,结合化学特征峰可能的化合物归属,全力购得标准化合物46个;再者,对已获得标准品采集高分辨二级质谱图（MS/MS数据）,与样本特征峰二级质谱进行精准比对。最终从四逆散水提取和提取物中精准鉴定39个化合物,分别来源于君药柴胡的柴胡皂苷D（saikosaponin D）、柴胡皂苷A（saikosaponin A）、异嗪皮啶（isofraxidin）、柴胡皂苷F（saikosaponin F）,臣药白芍的儿茶素（（+）catechin）、芍药苷（paeoniflorin）、羟基芍药苷（oxypaeoniflorin）、芍药内酯苷（albiflorin）、苯甲酰芍药苷（benzoylpaeoniflorin）、,佐药的枳实的柚皮素（naringenin）、柚皮苷（naringin）、柠檬苦素（limonin）、川陈皮素（nobiletin）、红橘素（tangeretin）、柚皮芸香苷（narirutin）、高圣草素（homoeriodictyol）、橙皮内酯（meranzin）、异橙黄酮（isosinensetin）、橙黄酮（sinensetin）、5,7,8,4’-四甲氧基黄酮（5,7,8,4’-tetramethoxy flavone）、3’,4’,7,8-四甲氧基黄酮（3’,4’,7,8-tetramethoxyflavone）、新西兰牡荆苷Ⅱ/维采宁-2（vicenin-2）,使药甘草的异甘草素（isoliquiritigenin）、芒柄花素（formononetin）、甘草酸/甘草甜素（glycyrrhizic acid）、甘草苷（liquiritin）、芹糖甘草苷（liquiritin apioside）、芹糖异甘草苷（neolicuroside）、异甘草苷（isoliquiritin）、芒柄花苷（ononin）、甘草素（liquiritigenin）、甘草香豆素（glycycoumarin）、甘草利酮（licoricone）、异夏佛托苷（isoschftoside）、光甘草酚（glabrol）、新西兰牡荆苷Ⅱ/维采宁-2（vicenin-2）、甘草皂苷G2（licorice saponin G2）、isoangustone A和glyasperin D,而橙皮苷（hesperidin）在四种化合物中均有检测到。同时,发现两种溶剂的提取物,所表征的化合物有共性,也有个性,其中共性化合物在两种提取物的种含量差别显著,其中川陈皮素、橙黄酮、甘草香豆素、柴胡皂苷F、儿茶素、芍药内酯苷、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、甘草皂苷G2、glyasperin D、isoangustone A等化合物在四逆散水提物和醇提物含量差别较大,但两者的合集能够更好的揭示四逆散的特征化学物质组成。综上,本研究建立基于高分辨液质联用系统的四逆散化学物质组表征方法,成功用于四逆散水提取物和醇提取物化学物质组的精准定性和定量研究,系统明晰该方剂的客观化学物质组成,这将为其后续的药效物质基础和作用机理研究提供科学基础,也将为其它中药及其方剂化学物质组研究提供方法学参考。
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