肺癌特异性靶向多肽的筛选及其在癌症诊疗方面的研究

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肺癌是严重危害人类的恶性肿瘤,面对目前临床上缺乏早期诊断方法及特异性的治疗手段的现状,本课题主要以筛选特异性结合多肽为基础,研究针对肺癌的诊断及靶向治疗方法。  本课题以细菌展示技术和流式细胞分选术为基础,经过6轮筛选从细菌展示的多肽库中得到60个单克隆细菌,单克隆细菌同肺癌A549细胞特异性结合率高达80%,测序得到7条靶向肺癌细胞的多肽序列。使用4%多聚甲醛对细菌进行固定,固定后细菌和A549细胞结合达到极好结合效率(>70%)及特异性,并且可以维持这种能力30天以上。同样的结论也经由小鼠的A549组织切片来验证。以多肽特异性识别和细菌荧光为基础,我们首次提出固定后的细菌作为诊断试剂在临床上应用的可能。  在利用多肽进行靶向治疗上应用方面我们使用连接多肽的微球去验证特异性多肽单独作为靶向引导分子的靶向功能,结果显示出明显的靶向效果。我们合成了中性长循环脂质体作为药物载体,使用挤压法控制粒度分布在80-120nm,大小均一,保存40天后仍能保持结构的完整;借助包裹siRNA来验证脂质体介导的RNAi效果,无论是PCR结果还是Western Blot的结果,都显示明显的RNAi效果,表明合成的脂质体适合作为基因药物载体。  课题筛选得到针对肺癌细胞A549的特异性的多肽,开发一种应用固定的荧光细菌作为诊断试剂的新方法,在肺癌的靶向治疗方面完成了药物载体的构建及靶向分子的表征工作,为肺癌的诊断及治疗研究做出了实用数据支撑及方向性探索。
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