第一部分 人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞的体外培养目的 探讨人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞体外培养及扩增的方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法 抽取健康成人骨髓,梯度离心法获得单核细胞。用含体积分数为10%小牛血清的RPMI-1640作为培养液,于37℃恒温,5%CO₂浓度,饱和湿度培养箱培养。传2代人骨髓间质干细胞加诱导液(RPMI-1640完全培养液中含地塞米松10^-8mol/L、甘油磷酸钠10mmol/L、维生素C 50mg/L)诱导成为骨髓间质成骨细胞。无菌条件下取新鲜脐带,胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞,当原代培养细胞80%以上汇合后,用胰蛋白酶消化传代。分别对两种细胞进行鉴定。结果 体外培养的人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞生长良好,表现出各自较典型的形态特征。骨髓间质成骨细胞用诱导液连续培养14天,在倒置显微镜下观察到明显的矿化结节形成;脐静脉血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色阳性。结论人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞取材方便,易于分离、培养、扩增,所培养的细胞体外生长稳定,可作为骨组织工程的种子细胞。第二部分 1,25-（OH）₂D₃在成骨细胞与血管内皮细胞联合培养中的作用目的 研究人骨髓间质成骨细胞（hMSO）与脐静脉血管内皮细胞（hUVEC）共培养时,1,25-（OH）₂D₃对细胞活性及碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OCN）含量的影响。方法 以相同总细胞数接种24孔细胞培养板,1,25-（OH）₂D₃