在细胞的信号转导过程中,NF-κB通路可以激活或者抑制核内基因的表达,从而将外界的刺激转化成细胞的信号。在免疫系统中,NF-κB在控制抗原受体信号转导通路、调控诱导核转录因子中同样起关键作用。BCL 10是参与NF-κB通路的一个重要功能基因。BCL 10正常的表达水平可以促进免疫因子的产生,增强机体的天然免疫和抵御感染的能力。反之,BCL 10的异常表达,比如过表达、过度磷酸化和核内表达会导致一系列细胞因子的非正常表达,从而影响正常细胞的生理功能,甚至会导致淋巴瘤等多种疾病的发生。已知BCL10的CARD结构域、磷酸化位点以及C末端序列参与几乎全部蛋白功能的发挥。参考以上的研究结果,我们开展猪BCL 10的研究工作。实验室前期工作:通过电子克隆得到猪BCL 10的全长基因,通过特异性引物在猪脾脏克隆到该基因片段,并得到该基因原核表达蛋白,掌握了其原核表达特点。同时,检测结果显示,猪BCL 10基因mRNA在脾脏中表达最高,胸腺、大脑和下颌淋巴结表达次之,肝脏只有微量表达,肾脏没有表达,初步获得该基因在猪体内的表达情况。本研究进一步探讨猪BCL 10的CARD结构域相关功能,通过该基因序列分析和真核表达观测,取得以下结果:1.根据猪BCL 10基因的特点,通过激酶的作用位点和空间结构的预测,找到了可能与其核内表达相关的位点,并成功构建出完整猪BCL 10基因的真核表达载体pEGFP-B。同时,通过大引物扩增法构建出真核表达载体pEGFP-D（缺失CARD结构域的猪BCL 10基因）和pEGFP-P（缺失Thr-Ser-Ser位点的猪BCL 10基因）。2.转染猪脐静脉血管内皮细胞系（SUVEC）后,Western Blot检测表明融合蛋白得到表达。分析发现,TSS位点（Thr-Ser-Ser）参与猪BCL 10的CARD结构域与其它蛋白的相互作用,是该基因的重要位点。同时,TSS位点的缺失会导致BCL 10出现核内表达。这些结果证实,TSS在猪BCL 10基因中具有重要作用。3.细胞周期变化测定表明,猪BCL 10的CARD结构域会引起细胞的G 1期缩短,S期和G 2/M期延长,表明该结构域在细胞生长过程中影响DNA的复制以及细胞有丝分裂,过度表达会导致细胞在有丝分裂前期停滞积累,但不会导致细胞凋亡。从而为进一步研究猪BCL 10蛋白在信号转导中的作用特点,以及淋巴瘤等疾病的诊断与治疗奠定基础。