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本文从细胞膜仿生的角度出发,针对蛋白质药物在使用过程中出现的稳定性差,生物利用度低等问题,基于细胞膜仿生磷酸胆碱改性壳聚糖PCCs,采用离子交联法构建了一种蛋白质药物细胞膜仿生纳米载体,系统研究了仿生纳米载体对重组FGF受体胞外段(msFGFR2c)的负载和释放、与呼吸道上皮细胞Calu-3、人胚肺成纤维细胞MRC-5的相互作用机制,并以博来霉素诱导肺纤维化大鼠为动物模型评价了经肺给药仿生纳米载体对msFGFR2c抗纤维化治疗效果的改善。首先,以msFGFR2c作为包载的目的蛋白,通过离子交联法制备了载药纳米微粒PCCs/msFGFR2c,并以水溶性季铵盐壳聚糖HTCC构建HTCC/msFGFR2c为对照,测得PCCs/msFGFR2c和HTCC/msFGFR2c的粒径分别在190nm和210nm左右,相应表面电位分别在0.81mV和9.7mV左右。PCCs/msFGFR2c、HTCC/msFGFR2c的包封率分别在47.2%和27.19%左右,载药量分别在9.4%和5.8%左右。原子力显微镜和透射电镜显示纳米粒子形态为类球型。体外释药试验得出:在24h内,PCCs/msFGFR2c在pH=5.5和7.4的体外环境下释放率分别达到了84%和76%,HTCC/msFGFR2c则分别为76%和70%,表明PCCs纳米系统具有较好的药物缓释功能。体外细胞毒性实验结果表明:当PCCs纳米粒(PCCs-NP)的浓度达到2.0mg/mL时,对MRC-5和Calu-3细胞均无毒性,而HTCC纳米粒(HTCC-NP)的浓度达到0.5mg/mL时就已经对MRC-5和Calu-3细胞有毒性,说明PCCs-NP的生物相容性优于HTCC-NP。细胞摄取实验结果表明:MRC-5和Calu-3细胞摄取PCCs和HTCC及其纳米载体粒子存在时间和浓度依赖性,在一定摄取时间和摄取浓度范围内呈正相关。荧光纳米载体微粒在亚细胞水平的分布实验得到:在2.0h内被摄入的纳米载体粒子主要分布在细胞Calu-3的细胞质中,在细胞溶酶体内没有观察到纳米载体粒子。以Calu-3细胞建立Transwell呼吸道上皮细胞转运模型。TEER实验结果显示:在AP端加入浓度为0.125mg/mL的荧光标记PCCs-NP和HTCC-NP纳米载体粒子作用4h,经过24h后TEER值均能够完全恢复,表明两者在该浓度作用4h内对Calu-3细胞单层紧密连接结构的影响是可逆的;但是在AP端加入浓度为0.25mg/mL的荧光标记纳米粒子时,PCCs-NP对Calu-3单细胞层TEER的影响是可恢复,而HTCC-NP对Calu-3细胞单层TEER的影响不可恢复,表明此浓度作用下PCCs-NP对Calu-3细胞单层紧密连接结构的影响是可逆的,而HTCC-NP对Calu-3细胞单层紧密连接结构的影响则不可逆。转运试验结果表明:壳聚糖衍生物PCCs和HTCC制成纳米粒子PCCs-NP、HTCC-NP后,其跨Calu-3细胞单层的转运效率和表观渗透系数Papp都有所提高。免疫荧光实验表明:在作用浓度为0.25mg/mL时,PCCs-NP对紧密连接蛋白ZO-1的表达几乎没有影响,PCCs和HTCC都能在不同程度上减弱ZO-1的表达,HTCC-NP则能够完全抑制ZO-1的表达,表明两种纳米载体具有不同的跨上皮细胞层机制。建立博来霉素诱导的Wistar大鼠肺纤维化模型,通过肺给药方式研究了负载msFGFR2c的纳米系统对肺纤维化大鼠的疗效。大鼠的体重、肺组织HE及Massion染色、X光结果都表明PCCs/msFGFR2c纳米系统对肺纤维化有明显的抑制作用,且优于自由msFGFR2c组。总的来说,本研究制备的仿生纳米载体粒子具有良好的生物相容性,可以改善蛋白药物的经肺给药治疗效果,有望成为一种优良的肺给药蛋白药物载体材料。