目的：以解脲脲原体(Uu)血清型3(T3)和解脲脲原体血清型8(T8)全菌蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗Uu的多克隆抗体。以制备的多克隆抗体建立间接ELISA法检测和鉴定Uu的方法。方法：(1)培养T3型和T8型解脲脲原体,超声破碎法裂解菌体蛋白,将所获得的蛋白与福氏佐剂乳化,分4次对新西兰大白兔进行多点皮下注射,经过4次免疫后取血,分离血清。(2)将抗血清按照1：1000,1：2000,1：4000,1：8000,1：16000,1：32000,1：64000,1：128000比例稀释,同时以1：5000稀释的的免疫前血清为阴性对照,以westernblot法检测制备抗血清的特异性与效价。(3)以1：1000,1：2000,1：4000,1：8000,1：16000,1：32000,1：64000,1：128000稀释的抗血清,对同种抗原进行间接ELISA试验,并且以未加入抗原组为阴性对照。(4)应用Graphpad prism6.0软件进行结果分析,以倍比稀释的血清稀释度对相应的ELISA结果作图,确定用于ELISA检测的最适血清稀释度。(5)应用如上所述血清及相应稀释度分别对101CCU至107CCU浓度的同种血清型和不同血清型的Uu进行ELISA试验,以确定所建立方法的灵敏度和特异性。结果：(1) western blot结果图中,在一定稀释度抗血清对应的泳道可见清晰条带,阴性对照无条带,表明在本次试验中所获得的抗体皆有较好的特异性。T3抗体的效价在1：16000至1：32000之间,T8抗体的效价在1：32000至1：64000之间。(2)在不同浓度稀释的抗血清对同种抗原的ELISA试验中,加入抗原组与未加抗原的对照组比较,两组在统计学意义上有差异。(3)经Graphpad prism6.0软件分析不同稀释度抗血清与抗原的ELISA反应对应的OD值曲线在1：8000稀释度的位置上达到相对饱和,确定1：8000稀释的抗血清是ELISA试验的最适合应用浓度。(4)在相同的抗原浓度下,多克隆抗体与同种抗原反应结果显著高于与异种抗原反应的结果(P<0.05),证明本研究中建立的间接ELISA法具有较好的特异性。(5)经过1：8000稀释的抗血清与浓度为1O1CCU至107CCU的菌体反应,除101CCU外,其余浓度与阴性对照比较均有显著差异(P<0.05),证明本方法具有较好的灵敏度。结论：(1)以剂量250μl/只的T3和T8型解脲脲原体全菌蛋白免疫新西兰大白兔,可获得较好特异性和较高效价的多克隆抗体。(2)以本研究中制备的多克隆抗体建立的检测Uu的ELISA法有较好的特异性和灵敏度,能够达到临床使用需要,可作为临床Uu与Up检测的辅助检测方法。