【摘 要】
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开发和应用新的免疫标记物,其目的是为了提高免疫测定的灵敏度、特异性,使测定过程简单、快速。利用基因工程技术直接将抗体或抗原与标记物(如酶)以融合方式表达,可避免繁琐
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开发和应用新的免疫标记物,其目的是为了提高免疫测定的灵敏度、特异性,使测定过程简单、快速。利用基因工程技术直接将抗体或抗原与标记物(如酶)以融合方式表达,可避免繁琐且低效率的酶与蛋白质的化学交联,而且无需先得到纯化的标记物和抗体或抗原。本研究中将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A, SPA)基因重组,表达既有EGFP荧光活性又有蛋白A生物学活性的双功能蛋白质并应用于免疫测定中。EGFP的荧光特性使免疫反应呈绿色荧光可以直接观测,而蛋白A能与多种哺乳动物血清中IgG的Fc段非特异性结合,尝试开发一种特异、灵敏、简便和快速的新型免疫亲和试剂。 我们根据pEZZ18质粒(含蛋白A基因)和EGFP基因(pT1EGFP-N1质粒)序列,设计一对引物,通过PCR扩增得到EGFP基因,构建原核表达载体pEZZ-EGFP。由于EGFP产生荧光不需要加入任何外源底物、酶或其他辅助因子,而且,EGFP发射的荧光用肉眼或荧光显微镜就可以观测到。在转入pEZZ-EGFP质粒的细菌中表达EGFP融合蛋白可使菌落呈现绿色,可在氨苄青霉素抗性平板上直接筛选绿色菌落,即为阳性重组转化子。在原核表达载体pEZZ-EGFP系统中,外源基因表达由Lac启动子与金黄色葡萄球菌蛋白A启动子双重控制非诱导型表达,有利于外源蛋白的分泌。利用金黄色葡萄球菌蛋白A的信号肽序列,可将外源基因的表达产物分泌到培养基中。另外5′端蛋白A的IgG结合区序列(ZZ),亦可以提高外源蛋白的可溶性,提高其分泌效率。 利用大肠杆菌表达PA-EGFP融合蛋白,通过对表达产物的纯化、荧光活性
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摘 要：当前，国有企业正在构建现代企业制度，纪检监察工作同样面临严峻形势。本文主要现代企业制度下国有企业纪检监察工作面临难题出发，对如何高效推进纪检监察工作进行探讨。 关键词：现代企业制度；国有企业纪检监察；工作思路 进入21世纪后，国内经济社会政治体制改革加速，国有企业也朝着现代化的方向发展，且在探索中不断完善。但国有企业改革受到诸多因素制约，同样使得纪检监察工作同样暴露出较多问题，严重影响
摘 要：本文主要以当前中职体育教学面临的挑战、机遇与对策为重点进行阐述，结合当前中职体育教学面临的挑战和机遇为主要依据，从挑选合适的体育教材、创新体育教学模式、提高教师自身的素质这几方面进行深入探索与研究，其目的在于提升中职体育教学质量和水平。 关键词：中职体育；体育教学；教学模式 在新课改背景下，中职院校得到了良好的发展，其在教育领域中的地位也在不断上升。目前，中职教育的教学模式与教学方式在
摘 要：足球运动作为日常生活中的体育项目，在全世界范围内都很受欢迎，并且足球早已被纳入初中的体育教学当中。作为一项有氧运动，足球不仅能够锻炼学生的身体素质，同时在运动的过程中还能培养学生们得到团队意识，是非常有意义的一项运动。但是就目前的情况来看，初中体育的足球教学中还存在一定的不足，尤其是在学生对足球兴趣的培养方面，存在很大的问题，并不能激起学生对足球的学习兴趣。 关键词：初中体育；足球教学；
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摘 要：受到社会发展的影响，人们对于生活环境的要求从居住需求转变为舒适性的生活需求，由此可见，十分有必要优化城市建筑居住舒适性，而城市建筑居住舒适性与城市建筑景观设计之间是具有紧密相连的关系，因此，为了实现更好的发展，不少城市逐渐将立体绿化融入到城市建筑景观设计之中，通过这一形式的采取，既改善和保护城市的生态环境，又满足人们对于居住舒适性的要求，是具有多个层面的意义，为此，本文就围绕立体绿化在城市
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