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目的:枯否细胞(KCs)在肝移植免疫中起着既促进排斥反应又诱导免疫耐受的双重作用,其确切机制尚不明确。新近发现Notch1/Jagged1通路参与了机体诸多免疫调控环节,其免疫调节机制可能比单因素调节因子更强,但针对Notch1/Jagged1通路的研究尚未涉及移植领域。因此,本研究旨在选择肝KCs为靶细胞,以Notch1/Jagged1通路为切入点,初步探讨Notch1/Jagged1通路通过对KCs激活炎症反应的影响,进而诱导移植肝免疫耐受形成的具体分子机制,并运用这种效应,提出可能的相关疾病治疗方式。方法:应用改良的Kamada“二袖套管”法建立C57BL/6→C3H小鼠原位肝移植急性排斥反应模型。实验动物随机分为4组:sham组,NS组,AAV-GFP组,AAV-Jagged1组。各小鼠于移植后3h、6h、24h取动脉血0.5mL,然后处死小鼠,收集肝脏标本。提取各组肝脏KCs,免疫荧光检测KCs Notch1/Jagged1表达情况;生化检测各组小鼠血清sAST、sALT;检测各组肝脏凋亡情况;HE检测各组小鼠肝组织病理变化情况;Western blot检测p-JNK和cleaved-caspase3蛋白表达水平。体外提取KCs并验证Notch1/Jagged1表达。在体外分为4组,Sham组,LPS+NS组,LPS+shRNA-GFP组,LPS+shRNA-Jagged1组。为通过慢病毒转染沉默Jagged1后应用Western blot、qRT-PCR等验证Notch1-Jagged1通路在体外如何调节LPS诱导的炎症反应。结果:1.(1)肝移植术后KCs被激活。术后3h、6h、24h KCs Notch1/Jagged1蛋白及mRNA相对表达水平相对表达明显升高且高于sham组(P<0.05)。(2)术后24h,与对照组比较,AAV-Jagged1组血清肝功sAST、sALT水平明显增高(P<0.05)。AAV-Jagged1组的肝组织损伤评分明显高于对照组(P<0.05)。AAV-Jagged1组凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05)。AAV-Jagged1组p-JNK和cleaved-caspase3蛋白表达水平明显高于对照组的(P<0.05)。2.体外培养的KCs在LPS(100ng/ml)刺激24h后通过免疫荧光,Western blot、qtPCR检测发现Notch1/Jagged1表达较对照组明显升高(P<0.05)。shRNA-Jagged1组在LPS刺激下炎症因子的分泌明显增加(P<0.05)。使用shRNA-Jagged1沉默了KCs中的Jagged1,我们发现在LPS处理24小时后,shRNA-Jagged1组中Notch和Hes1的表达降低,而对照组则没有(P<0.05)。用shRNA-Jagged1预处理敲除Jagged1后,明显抑制LPS刺激的KCs中的Hes1和p-AKT(P<0.05)。然而,shRNA-Jagged1组PTEN,TLR4和NF-κB的表达上调(P<0.05)。进一步激活下游炎症因子,shRNA-Jagged1组中IL-1β,TNF-α的表达显着增加(P<0.05)。结论:1.阻断KCs Notch1-Jagged1可能通过影响PTEN/AKT/TLR4/NF-κB通路增加重肝脏炎症反应,诱发肝脏急性排斥反应。2.阻断KCs中Notch1-Jagged1通过激活JNK信号通路加重肝脏细胞的凋亡。