铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginoisa, PA）为临床常见菌，在医院内感染中占有相当重要的地位，主要引起通风性呼吸道感染、烧伤性继发性感染和囊性纤维化病人的继发性肺炎。由于PA对多种常用抗生素(如某些β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氯霉素等)耐药，因此给临床治疗造成许多困难。PA耐药的原因是多方面的，其中之一就是细菌生物被膜(bacterialbiofilm，BF)的形成。细菌生物被膜，又称菌膜，是指细菌吸附于固体物质表面后(如医用有机材料或机体豁膜表面)，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白等多糖-蛋白复合物，使细菌相互粘连并将其自身菌体包裹于生物被膜之中，从而形成致密的膜样状态，造成泛耐药。多糖基质是形成生物膜的必要条件，糖尿病患者体内的高糖环境对铜绿假单胞菌形成生物膜是否有影响？本课题通过研究不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响，为临床糖尿病患者铜绿假单胞菌感染提供治疗思路。本研究收集了42株临床分离的铜绿假单胞菌，对其进行耐药性测定、生物膜形成能力检测、耐药性与生物膜相关性分析、不同浓度葡萄糖对生物膜形成能力和形成过程的影响研究。1、铜绿假单胞菌的耐药率与生物被膜形成能力的相关性分析菌株来源：连续收集山西医科大学附属第二医院2012年3月到2012年6月临床分离的42株铜绿假单胞菌菌株。方法：采用平板结合结晶紫染色法建立铜绿假单胞菌生物被膜模型，定量分析42株临床分离的铜绿假单胞菌生物被膜形成能力；采用琼脂倍比稀释法测定菌株的耐药性；概率法检验生物被膜形成能力与耐药性的相关性。结果：42株临床分离的铜绿假单胞菌对丁胺卡那耐药率为2.4%；对头孢他啶、哌拉西林/舒巴坦均为11.9%；对左氧氟沙星为14.2%，对哌拉西林为19.0%，对美罗培南的耐药率达到28.6%；对头孢哌酮-舒巴坦为35.7%，对氨曲南为40.5%。41株（97.6%）具有生物膜形成能力，其中生物膜形成能力弱的为19株（45.2%）、生物膜形成能力强的22株（52.4%）、1株菌（2.4%）没有形成生物被膜。铜绿假单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦的耐药性随着生物被膜的形成能力增强而增强。2、半定量检测不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成能力的影响菌株来源：本文第一部分筛选出的22株生物膜强阳性铜绿假单胞菌(A570≥1.0)。方法：采用7组浓度葡萄糖培养液构建铜绿假单胞菌生物膜感染模型，结合结晶紫染色法对生物被膜形成能力进行半定量分析。结果：生物膜结晶紫染色半定量实验显示，随培养液中葡萄糖浓度的升高，22株待测菌的生物膜形成能力均呈上升趋势(拟合直线斜率均>0)；其中4株待测菌在葡萄糖浓度≥11.1mmol/L时上升趋势明显，拟合直线斜率为0.025~0.031；其余18株菌的A570值变化不显著，拟合直线斜率为0.004~0.019。3、观察不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成过程的影响菌株来源：38号铜绿假单胞菌，为本文第二部分中葡萄糖对生物膜形成能力影响最大的菌株，拟合直线斜率为0.031。方法：采用7组浓度葡萄糖培养液构建PA生物膜模型，激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察生物膜的形成过程及厚度。结果：CLSM观察葡萄糖对生物膜形成过程影响实验表明：与无糖组及低浓度葡萄糖组相比，当葡萄糖浓度≥11.1mmol/L时，生物膜形成速度加快、成熟时间减少、粘附能力增强、厚度增加(P <0.05)。结论:1、该院铜绿假单胞菌对丁胺卡那最敏感；对头孢他啶、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、哌拉西林的敏感性次之；对头孢哌酮/舒巴坦和氨曲南的耐药率最高。2、该院铜绿假单胞菌生物膜形成阳性率高，而且对头孢哌酮/舒巴坦的耐药性与生物被膜的形成能力呈正相关关系(P=0.047)。3、对于铜绿假单胞菌生物膜阳性株而言，生长环境中葡萄糖的存在对其生物膜的形成有诱导作用。随着葡萄糖浓度的增加，生物膜成熟速度加快、成熟时间减少、粘附能力增强。4、葡萄糖浓度≥11.1mmol/L时，铜绿假单胞菌的生物膜厚度逐渐增加（P<0.05），葡萄糖浓度≥20mmol/L时，生物膜厚度显著增加（P<0.01）。