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从黄鳝垂体cDNA文库和脑cDNA文库克隆得到两种GnRH受体基因,分别命名为GnRH-RI和GnRH-RU。GnRH-RⅠ cDNA全长1,822个碱基,编码一个414个氨基酸的蛋白。CmRH-RII cDNA全长1,534个碱基,编码一个376个氨基酸的蛋白。序列分析表明这两个基因都具有G蛋白耦联受体的七个跨膜区域典型结构。进化树分析表明,黄鳝GnRH-RⅠ与杜氏鰤(Seriola dumerilii,Risso)GnRH-R cDNA、条纹狼鲈(Morone saxatilis,striped bass)垂体GnRH-R cDNA有高于80﹪的同源性,而黄鳝GnRH-RⅡ与斜带石斑鱼(Epinephelus coioides,orange-spotted grouper)GnRH-R cDNA有89﹪同源性。
使用两步法RT-PCR结合Southern印迹法,检测了两种GnRH-R分别在雌性和雄性不同组织中的表达。在雌性和雄性黄鳝,GnRH-RⅠ mRNA都主要在垂体和性腺有较高表达,脑部各区域和脾脏有微量表达;而GnRH-RⅡ mRNA在脑部各区域、脾、胰、肾、血有较高表达,在垂体、性腺及其他外周组织有广泛的较低表达。
用荧光定量RT-PCR,检测了两种GnRH-R在黄鳝雌性发育周期各时期及性逆转过程各时期的表达。在雌性发育GSI 1-2﹪时期,垂体中GnRH-RI mRNA表达显著高于GSI<1﹪和GSI>5﹪时期;GSI 2.5﹪时期卵巢中GnRH-RⅡ mRNA表达与GSI<1﹪和 GSI 1-2﹪时期相比显著下降。而垂体GnRH-RⅡ和卵巢GnRH-RI mRNA在各时期的表达没有显著变化。在性逆转过程的间性早期,黄鳝性腺中两种GnRH-R mRNA表达均有显著上升;雄性时期GnRH-RⅠ mRNA表达显著上升。下丘脑GnRH-RⅠmRNA表达在黄鳝性逆转过程中有持续下降的趋势,而GnRH-RⅠ无显著变化。黄鳝两种GnRH-R的mRNA表达在空间和时间上的特异性和差异,提示它们可能有不同的配体选择性和/或具有不同的功能分工。离体孵育实验显示,三种GnRH分别处理雌性、间性黄鳝垂体后,对垂体GnRH-RⅠ mRNA表达都有非常显著的下调作用。而GnRH-RⅡ mRNA表达在孵育后的雌性垂体中也有显著的下调,在间性垂体中则无明显变化。三种GnRH分别处理间性黄鳝下丘脑后,只有pjGnRH对GnRH-RⅠmRNA表达有显著上调;三种GmRH对GnRH-RⅡ mRNA表达均无明显影响。GnRH处理雌性黄鳝下丘脑,对两种GnRH-R mRNA表达均无显著影响。