由于水产养殖业的抗生素滥用,导致水产致病菌的耐药性逐年增加,严重危害食品安全。本文以淡水鱼的肠道为样品,分离致病菌和噬菌体,研究鱼类消化道中噬菌体种群多样性,同时采用分子生物学方法,筛选宿主噬菌体受体分子相关基因。收集62份淡水鱼肠道样品,分离致病菌和噬菌体。使用TCBS、SS和MAC三种选择性培养基,共分离到445株革兰氏阴性菌,并作为指示菌分离噬菌体。通过富集培养和双层平板法,分离到75株噬菌体。通过分析16S rRNA基因对宿主菌进行鉴定,结果显示,75株宿主菌分布在3个科、11个属。曾经被报道的宿主菌包括:气单胞菌属(Aeromonas)37株,弧菌属(Vibrio)1株,柠檬酸菌属(Citrobacter)19株,沙雷氏菌属(Serratia)5株,摩根氏菌属(Morganella)2株和变形杆菌属(Proteua)3株。首次被发现的宿主菌包括:肠杆菌属(Enterobacter)2株,步丘氏菌属(Buttiauxella)2株,邻单胞菌属(Plesiomonas)2株,克吕沃尔氏菌属(Kluyvera)1株和普罗维登斯菌属(Providencia)1 株。本实验中分离株数最多,但气单胞菌16SrRNA基因同源关系较近,故本研究中通过RAPD-PCR,PFGE和ERIC-PCR三种技术对37株气单胞菌进行分型。RAPD的分型结果:37株气单胞菌分布在2—3个簇上,并且簇内由4—6个亚组构成,部分菌株的同源性能够达到100%。PFGE和ERIC-PCR也给出了类似的结果,说明气单胞菌存在遗传多样性。构建气单胞菌Tn5G转座子突变文库,共筛选到29个耐受噬菌体ΦA8-29的突变子。发现有24株突变子菌体易沉降,故测定所有突变子的吸附率和泳动能力。吸附率测定结果显示,所有的突变子对ΦA8-29的吸附率都低于60%。泳动能力实验(swimming motility)的结果表明,突变子1-10的泳动能力提高了 30%,突变子2-10、2-11和2-12与野生型相似,其余均降低20%以上。反向PCR分析结果表明,两个基因分别被转座子阻断,即二磷酸核糖差向异构酶和磷酸核糖转移酶。此两个基因都位于O—抗原生物合成基因簇上,分别与嗜水气单胞菌AL06-06和肠道沙门氏菌G1399的同源性为83%和94%。