论文部分内容阅读
以大米蛋白为原料研究抗氧化肽的制备技术及其性能。采用酶水解大米蛋白的方法生产高活性的抗氧化肽。以酶解液对DPPH自由基清除率为考察指标,从七种商品蛋白酶中筛选出三种蛋白酶:风味酶、中性酶、木瓜蛋白酶;分别进行正交试验,得出三种酶在各自最佳作用条件下对DPPH自由基清除率分别为75.2%、89.5%和58.8%;大米抗氧化肽的EC50值分别为2.92 mg/mL、2.17 mg/mL和3.86 mg/mL。在各自最佳反应条件下得到的三种酶的水解产物,进行DPPH自由基清除率和EC50值的横向比较,最终确定中性蛋白酶为本试验用酶,其最佳制备工艺参数为,底物浓度10g/100ml,加酶量8%,酶解pH 6.0,酶解温度60℃,时间30min。在大米蛋白单酶水解实验基础上,将选出的三种酶两两组合,进行双酶分步水解试验,发现加酶顺序对水解产物的抗氧化活性有较大的影响;同时第一步酶解后灭酶明显优于不灭酶。最终比较得到最优组合:大米蛋白先经中性酶水解30min,灭酶后再由木瓜酶水解15min,得到的酶水解产物EC50为1.23mg/mL,与单酶相比下降了43.3%。在超声功率1500W、超声初始温度40℃条件下超声处理大米蛋白溶液20min,再用中性酶水解制备抗氧化肽,其DPPH自由基清除率可达到74.8%,EC50为0.932 mg/mL。超声处理原料使水解产物的EC50值比没做处理的显著下降了57.1%。研究了制备得到多肽的抗氧化性能试验,发现大米抗氧化肽具有较强的清除O2。-、DPPH自由基、羟自由基,其EC50分别为0.0678 mg/mL、0.932 mg/mL和0.117mg/mL。以732阳离子交换树脂、SepHadex-G25和HPLC制备柱纯化大米抗氧化肽,最终研究得到两种抗氧化肽。使用美国ABI的串联飞行质谱仪4700 TOF/TOF对分离到的抗氧化肽进行结构分析,得到两个多肽序列分别为Gly-Val-Pro-Ser-Ala-Val-Ser-Arg-Asn-Met-Thr-Arg-Ser-Arg和Leu-Ala-Ser-Gln-His-Leu-Val-Ala-Ile-Leu-Asp-Pro-Pro-Arg,其EC50值分别为:4.91μM和5.39μM。