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α-半乳糖苷酶在高等植物体内广泛存在并具有重要生理功能。目前关于植物α-半乳糖苷酶的研究水平远滞后于蔗糖代谢相关酶,克隆该酶基因的启动子序列可为进一步研究它们的生理功能提供思路和手段。本试验首先根据黄瓜3种α-半乳糖苷酶基因的cDNA全长序列设计引物,克隆得到各自部分基因组序列。根据这些序列进一步设计基因特异引物,分别采用DNA Walking SpeedUpTM Premix Kit和TaKaRa Genome Walking Kit两种试剂盒进行染色体步移,最终获得各自的启动子区域序列(碱性α-半乳糖苷酶Ⅰ转录起始位点前1855 bp,碱性α-半乳糖苷酶Ⅱ转录起始位点前1902 bp,酸性α-半乳糖苷酶Ⅱ转录起始位点前1420 bp)。其中碱性α-半乳糖苷酶Ⅱ5′端非翻译区(5′-Untranslated Regions, 5′-UTR )含有可能具有启动子调节功能的内含子1613 bp。PLACE软件分析表明,黄瓜3种α-半乳糖苷酶基因启动子区域序列除含有CAAT-Box,TATA-Box和T-Box等基本启动子元件外,还含有一些已被报道的重要顺式元件,如:与种子成熟和发芽有关的胚乳特异性表达调控元件AACACO REOSGLUB1、与叶片衰老相关的脱水胁迫和黑暗应答元件ACGTATERD1、与植物抗冻性有关的低温诱导响应元件MYCCONSENSUSAT、与果实成熟相关乙烯诱导反应元件ERELEE4和与植物受病害侵染后的防御反应相关病原菌诱导响应元件OSE2ROOTNODULE等,这些元件的存在与目前已知的α-半乳糖苷酶广泛而重要的生理功能相符。黄瓜3种α-半乳糖苷酶基因启动子区域的克隆使运用启动子报告基因法探索它们在黄瓜体内的表达规律成为可能,经序列分析预测的可能生理功能也为进一步的功能基因组学研究提供了线索。