山杏壳木醋液有效成分及生物活性研究

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本文采用热裂解技术制备山杏壳木醋液,根据木醋液中化学物质酸碱性的差异,利用pH梯度萃取法分离不同酸性物质并通过化学分析和生物活性测定研究了山杏壳木醋液中不同酸性组分的抗氧化活性和抑菌生物活性。试验结果如下:(1)采用pH梯度萃取法探索山杏壳木醋液中不同酸性组分的分离方法,得到酚类和有机酸类物质的分离工艺。结果表明50g/L和60g/L NaHCO3溶液能够有效富集木醋液中总酸含量高的A5、A6组分,分别为原木醋液总酸含量的1.66和1.91倍(以消耗标准NaOH溶液体积计算)。40g/L NaOH溶液能够富集萃余相中酚类物质,得到酚类含量达到1570.370mg/ml的P3组分,约为原木醋液有机相OA中酚类物质含量的1.95倍。(2)测定不同质量浓度NaHCO3溶液萃取物A1-A6以及不同质量浓度NaOH溶液萃取物P1-P4对食品腐败细菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌)的抑制活性。结果表明50g/L NaHCO3溶液萃取物A5对三种供试细菌有较强抑菌活性,其中对金黄色葡萄球菌抑制作用最强,抑菌能力明显强于原木醋液有机相OA。P1-P4组分对供试细菌有生长抑制作用但明显弱于A5。(3)通过测定3种供试菌体细胞外蛋白含量、细菌生长曲线,探讨A5组分对食品腐败细菌的抑制机理。结果表明,A5作用后3种供试细菌胞外蛋白质量浓度均比对照组有升高且生长曲线被破坏,且对金黄色葡萄球菌抑制作用最显著。观察SDS-PAGE电泳图可知,随培养时间增长,与对照相比添加A5后的金黄色葡萄球菌菌体蛋白电泳谱带变浅或者消失,说明A5对菌体蛋白正常代谢有一定的抑制,使其蛋白总量表达水平呈下降趋势。(4)通过测定4种中药乙醇提取物(丁香(Syringa)、黄芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)、槐花(Flos Sophorae)和金银花(Flos Lonicerae))对供试食品腐败菌的抑菌活性,发现丁香醇提物的抑菌效果最强,对供试细菌抑菌圈直径均在15mm以上,其中对大肠杆菌抑制作用最强,抑菌圈直径达到20mm左右。(5)为增强对革兰氏阴性菌和阳性菌的抑制活性,采用正交试验方法将A5与丁香醇提物复配。复合剂配方为20mg/ml丁香醇提物与A520mg/ml以1:3比例配制,对供试细菌的MIC分别为2.50mg/ml、2.75mg/ml、2.5mg/ml,抑菌效果明显强于单一组分及供试常用化学防腐剂(如苯甲酸钠,山梨酸钾)。稳定性试验结果表明复合剂具有良好的酸碱稳定性和热稳定性。(6)通过观测霉菌菌丝生长趋势研究了A1-A6和P1-P4对供试霉菌(毛霉(Mucor)、根霉(Rhizopus)、青霉(Penicillium glaucum))的生长抑制作用。结果表明A1-A6组分在36h内对供试霉菌有抑制作用,A5组分的抑制作用最强且呈良好的量效关系。P1-P4组分在24h内有明显抑菌活性,P3组分抑菌活性较强但明显弱于A5。将A5应用于草莓保鲜试验中,草莓在25℃下储藏四天后,经A5处理后的草莓病情指数最低。(7)研究了A1-A6和P1-P4对番茄早疫病原菌、棉花黄萎病原菌、苹果纶纹病原菌、梨黑星病原菌、苹果腐烂病原菌、葡萄炭疽病原菌等的抑菌活性,结果表明P3抑菌活性高于P1、P2和P4,但在同样处理条件下,A5组分对供试菌种的抑菌率分别是P3组分的1.32倍,1.39倍,1.40倍,1.54倍,1.42倍,1.81倍。(8)抗氧化活性测定试验结果表明A1-A6抗氧化活性均不高。P3具有强抗氧化活性,并且由稳定性试验结果可知P3具有良好的热稳定性和储藏稳定性,在pH4-7范围内其抗氧化活性无明显改变但在碱性条件下活性逐渐减弱。P3能有效延缓猪油、菜油、核桃油在高温条件下发生氧化变质且效果强于BHT。(9)柱色谱分离P3组分,测定经不同洗脱体系得到的各组分总酚物质含量、DPPH自由基清除率和抗脂质过氧化活性,通过GC-MS检测抗氧化能力最强组分,得到的主要化合物为2,6-二甲氧基苯酚。
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