【摘 要】
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目的:明确肝癌细胞中Pokemon对CyclinA的调控作用,为二者的后续研究奠定基础。方法:构建两段不同长度的CyclinA荧光素酶报告基因质粒载体:pLuc-300、pLuc-600,均分别与Pokemo
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目的:明确肝癌细胞中Pokemon对CyclinA的调控作用,为二者的后续研究奠定基础。方法:构建两段不同长度的CyclinA荧光素酶报告基因质粒载体:pLuc-300、pLuc-600,均分别与Pokemon表达质粒和pcDNA3.1(-)转染入体外培养的肝癌细胞HepG2中,培养48小时后采用双荧光素酶报告基因检测法检测CyclinA启动子的转录活性;将Pokemon siRNA和Scramber siRNA分别转染入肝癌细胞HepG2中,培养0、24、48、72小时后提取细胞总蛋白,采用Western Blot法检测Pokemon和CyclinA的蛋白表达。结果:双荧光素酶报告基因检测法显示构建的pLuc-300、pLuc-600均有转录活性,其中pLuc-300转录活性较pLuc-600强,Pokemon对二者的转录活性均有抑制。Western Blot法发现随着转染Pokemon siRNA时间的增加,Pokemon蛋白表达逐渐减少,CyclinA蛋白表达逐渐增加,呈明显时间依赖。结论:在肝癌细胞HepG2中, Pokemon抑制cyclinA的转录活性,并且抑制其蛋白表达。
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