猪CACNA1S基因的研究

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钙离子通道是由多个亚单位组成的多基因家族复合体,参与机体代谢,具有重要的生理功能;其中α1亚单位作为电压感受器,具有离子选择性,能为钙拮抗剂等多数药物提供结合位点并形成跨膜的亲水通道,是最重要的亚单位,其编码基因(CACNA1S)突变会导致人低钾性周期性麻痹和恶性高温综合征。人的CACNA1S基因被定位在1号染色体(1q31-32),而对于猪和其它动物尚未见报道。应用辐射杂种细胞系(RH panel)进行基因定位是继荧光原位杂交技术(FISH)后新近发展起来的一种有效的基因定位方法;该法简便易行,结果直观,能快速准确地提供可靠的基因定位信息。本研究根据人CACNA1S基因3′端非翻译区序列设计引物,对猪基因组DNA进行PCR扩增、测序,与人相应序列作同源性比较;然后采用IMpRH panel将CACNA1S基因定位于猪10p11-12。本实验根据人CACNA1S基因序列设计引物,通过RT-PCR和跨内含子扩增等方法得到猪CACNA1S基因约5380bp序列,其中外显子部分为2000bp,内含子部分约3380bp,经与人该基因相应部分外显子序列比较,同源性为64.6%-97.4%。运用PCR-SSCP技术对其中3045bp的DNA序列进行单核苷酸多态性检测,结果发现56个SNP突变点,其中外显子序列(1342bp)25个,内含子序列(1703bp)31个。在10个检测片断中:由引物对1S-47和1S-73所扩增片断未检测到多态SNP位点;其余引物对扩增片断均具有较好的多态性;根据三个多态的SNP’s位点,设计了三个PCR-RFLP检测方法,并进行了基因型检测。采用一般线性模型法分析了各基因位点对猪胴体性状及肉质性状的遗传效应,结果显示:位点1S-46对系水力存在极显著的影响(P<0.01),对肉色(L)、眼肌面积存在显著的影响(0.01<P<0.05),对肉色(h)和大腿pH值影响较大;其中BC、BD基因型对系水力的影响显著地大于CC、CD、DD基因型,BC基因型对肉色(L)的影响显著性地大于CC、CD、DD基因型,BD基因型显著性地大于DD基因型,BB基因型对眼肌面积的影响显著地大于BC、CC、DD基因型,CD基因型显著地大于DD基因型;位点1S-74对后腿重、背膘厚(中)和系水力均存在极显著的影响(P<0.01),对头重的影响也较大;其中AA、AB基因型对后腿重的影响显著地大于AE基因型,AC基因型对背膘厚(中)的影响显著地大于AA、AB、AD、AE基因型,AC、AD、AE基因型对系水力的影响显著地大于AB基因型。位点1S-61对后腿重存在极显著的影响(P<0.01),对活重的影响较大;其中AB基因型对后腿重的影响显著性地大于BC、CC基因型,AA基因型显著性地大于BB基因型。位点1S-64对大腿温度存在极显著性的影响(P<0.01),对眼肌温度存在显著性影响(0.01<P<0.05),对背膘厚(中)的影响较大;其中AB、BB基因型对大腿温度的影响显著性地大于AA基因型,BB基因型对眼肌温度的影响显著大于AA基因型。位点1S-70对后腿重存在显著性影响(0.01<P<0.05),其中AA基因型显著性地大于AB、AC、BB基因型。位点1S-72对后腿重存在极显著性的影响(P<0.01),对后腿肌肉重和背膘厚(前)影响较大;其中DD基因型对后腿重的影响显著性地大于AA基因型,AA、AB基因型显著性大于CC基因型;对后腿肌肉重的影响以DD基因型显著性大于AA基因型,对背膘厚(前)的影响以BB基因型显著性地大于CC基因型,DD基因型显著性的大于AA、CC基因型。酶切位点Eco72Ⅰ对后腿肌肉重和肉色(L)存在极显著性的影响(P<0.01),对眼肌面积和大腿pH值存在显著性影响(0.01<P<0.05);其中BB基因型对后腿肌肉重的影响显著性大于AA、AB基因型,AA、AB基因型对肉色(L)的影响显著性地大于BB基因型,AA基因型对眼肌面积的影响显著性地大于AB基因型,BB基因型对大腿pH值的影响显著性地大于AA基因型。XbaⅠ对背膘厚(中)存在显著性的影响(0.01<P<0.05),对后腿脂肪重和大腿pH值影响较大。
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