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目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对体外染锰致大鼠基底核原代神经元和星形胶质细胞损伤、DNA损伤及谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)等氨基酸类神经递质水平影响的体外研究。方法(1)神经元:培养至第八天的基底核神经元,分别①经0、25、50、100、200μmol/L氯化锰(MnCl2)单独作用24h。②单独给予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h,在倒置相差显微镜下观察神经元形态,用MTT法测定细胞存活率。③基底核神经元随机分为正常对照组(对照组)、染锰组、低、中、高剂量PAS-Na(L-、M-、H-PAS)对照组和干预组。对照组、L-、M-、H-PAS对照组神经元给予培养液培养24h;染锰组、L-、M-、H-PAS干预组神经元暴露于含MnCl250μmol/L培养液培养24h。接着,弃掉原培养液。L-、M-、H-PAS对照组、干预组分别给予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培养液培养24h。其余组培养液培养24h。然后,用噻唑蓝(MTT)法测定存活率,用试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA损伤,高效液相色谱(HPLC)荧光检测法测定细胞内外Glu、Gln、Gly及GABA含量。(2)星形胶质细胞:纯化鉴定后的基底核星形胶质细胞,分别①经0、125、250、500、1000μmol/L MnCl2单独作用24h。②单独给予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h,在倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞形态,用MTT法测定其存活率。③基底核星形胶质细胞被随机分为正常对照组(对照组)、染锰组、低、中、高剂量PAS-Na(L-、M-、H-PAS)对照组和干预组。对照组、L-、M-、H-PAS对照组星形胶质细胞给予培养液培养24h;染锰组、L-、M-、H-PAS干预组星形胶质细胞暴露于MnCl2500μmol/L培养液培养24h。接着,弃掉原培养液。L-、M-、H-PAS对照组、干预组分别给予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培养液培养24h。其余组培养液培养24h。用MTT法测定细胞存活率,SCGE测定DNA损伤,用HPLC荧光检测法测定大鼠基底核星形胶质细胞内外Glu、Gln及Gly含量。结果(1)神经元:①锰可引起基底核神经元形态损伤及存活率降低,呈一定的剂量反应关系;②高浓度(5000μmol/L)PAS-Na可损伤基底核神经元形态,使其存活率降低;③染锰组基底核神经元胞体肿胀、皱缩、突起减少。与染锰组比较,L-、 M-、H-PAS干预组神经元上述变化有所减轻,H-PAS干预组作用效果较好。与对照组比较,染锰组神经元存活率降低,L-、M-、H-PAS干预组神经元存活率比染锰组高(P<0.05);染锰组LDH漏出率比对照组高;L-、M-PAS干预组LDH漏出率比染锰组低(P<0.05)。染锰组GSH-Px和CAT活性都比对照组低;M-PAS干预组GSH-Px活性和M-、H-PAS干预组CAT活性比染锰组高(P<0.05)。染锰组尾部DNA百分率、Olive尾距均大于对照组;L-、M-、H-PAS干预组神经元彗星尾部DNA百分率、Olive尾距比染锰组低(P<0.05)。染锰组神经元内Glu、Gln含量比对照组低,GABA、Gly含量比对照组高;L-、M-、H-PAS干预组Glu、Gly和H-PAS干预组GABA含量比染锰组低,L-、H-PAS干预组Gln含量比染锰组高(P<0.05)。染锰组神经元外Glu、Gln含量比对照组低,Gly含量比对照组高;L-、M-、H-PAS干预组Gly含量比染锰组低,M-PAS干预组Glu含量比染锰组高(P<0.05)。(2)星形胶质细胞:①锰浓度为250μmol/L以上可引起基底核星形胶质细胞形态损伤及存活率下降,有一定的剂量反应趋势;②单纯PAS-Na对基底核星形胶质细胞形态及存活率无明显影响;③染锰组基底核星形胶质细胞胞体肿胀、皱缩。与染锰组比较,L-、 M-、H-PAS干预组星形胶质细胞上述变化有所减轻。染锰组细胞存活率比对照组低, M-、H-PAS干预组细胞存活率比染锰组高(P<0.05)。染锰组星形胶质细胞的彗星尾部DNA百分率、Olive尾距均大于对照组;L-、M-、H-PAS干预组神经元彗星尾部DNA百分率和H-PAS干预组神经元彗星Olive尾距比染锰组低(P<0.05)。染锰组星形胶质细胞内Glu、Gly含量比对照组高,Gln含量比对照组低。L-、M-、H-PAS干预组Glu和M-、H-PAS干预组Gly含量比染锰组低, H-PAS干预组Gln含量比染锰组高(P<0.05)。染锰组细胞外Glu、Gly含量比对照组高,Gln含量低于对照组。L-、M-、H-PAS干预组Glu、Gly含量比染锰组低,L-、M-、H-PAS干预组Gln含量高于染锰组(P<0.05)。结论体外染锰对大鼠原代基底核神经元和星形胶质细胞损伤明显,并引起DNA损伤及氨基酸类神经递质水平改变异常,PAS-Na对锰致神经元、星形胶质细胞的损伤、DNA损伤及氨基酸类神经递质的毒性影响有干预作用。