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目的(1)探讨不同浓度白藜芦醇(resveratrol,Res)对培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞细胞增殖,谷氨酸摄取量,谷氨酸转运体转录水平,谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)含量和活性及谷胱苷肽含量的影响,以探讨Res对星形胶质细胞抵抗谷氨酸兴奋性毒性作用的机制。(2)研究不同浓度Res对培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞S100B蛋白转录和分泌的影响,以进一步探讨Res对脑神经细胞的保护作用机制,为Res的临床治疗提供理论参考。方法原代提取SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,采用胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体进行免疫组化鉴定。干预用的Res用无血清的DMEM培养液稀释成不同浓度,终浓度为500、250、100、50、25、10、1μmol/L。对照组为药物浓度为0μmol/L的DMEM培养液(含醇量与药物组相同)。星形胶质细胞加入不同浓度的Res进行培养,通过5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖水平。采用同位素掺入法检测谷氨酸摄取量。ELISA方法检测S100B蛋白和谷氨酸代谢指标:总谷胱苷肽含量和谷氨酰胺合成酶含量与活性。实时荧光定量PCR法检测GLAST、GLT-1及S100BmRNA的表达水平。结果GFAP免疫组化鉴定星形胶质细胞纯度达95%以上。Res抑制细胞增殖,并具有剂量和时间依赖性,即随着作用时间延长和浓度的增加,抑制作用也明显增强。Res浓度为25μmol/L和50μmol/L时,谷氨酸摄取量和GSH含量显著增加(P<0.05)。而大于250μmol/L时,两者却降低。但在此高浓度下,GS的细胞含量与活性却显著升高(P<0.05),而其在浓度为0-100μmol/L时无显著变化(P>0.05)。Res浓度小于50μmol/L时,转运体GLT-1和GLAST mRNA表达无显著变化(P>0.05),而浓度大于100μmol/L时表达水平降低(P<0.05)。Res作用24h时,S100B蛋白的细胞分泌量在浓度为50μmol/L,100μmol/L,250μmol/L时明显升高(P<0.05),同时S100B mRNA表达有显著升高(P<0.05);而浓度为10μmol/L和25μmol/L时,S100B mRNA表达无显著变化(P>0.05)。结论Res可抑制星形胶质细胞增殖,对其谷氨酸代谢具有二元效应,即低浓度可促进星形胶质细胞的谷氨酸摄取,增加谷胱苷肽含量和S100B蛋白表达与分泌,具有神经保护活性,尤其是抵抗谷氨酸毒性而产生保护效应,在一些神经退行性疾病中具有一定的治疗意义。而在高浓度下降低谷氨酸代谢,可引起神经细胞损伤甚至凋亡。