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赤潮作为一种世界性的危害,其爆发时对于海洋环境、水产养殖乃至人类健康都会造成巨大损害,因此赤潮的起源和防治多年来一直是众多专家学者研究的热点。上个世纪九十年代提出的微全分析系统,具有微型化、集成化和便携化等优势。因此可以利用微流控芯片来模拟赤潮藻的自然生长环境,对群体及单个细胞进行精确的捕捉和控制,这也将为研究赤潮爆发的机制以及控制赤潮爆发提供一个新的技术形式。
本研究结合微流控芯片技术对塔玛亚历山大藻释放类似游动孢子的生物体(以下简称“游动孢子”)现象进行了初步的研究。在微流控芯片上进行连续培养,研究了塔玛亚历山大藻的生活史以及游动生物体的产生、释放、相互作用和生长等动态过程;对塔玛亚历山大藻细胞释放出的游动生物体进行形态和分子生物学鉴定;构建系统发育树了解游动生物体的进化过程对其进行初步分类;对此游动生物体存在的生态学意义进行研究。
正如Denn等[1]、Garcés等[2]和Leander等[3]在其文章中所讲,文中所提到的“游动孢子”并非实际意义上塔玛亚历山大藻生活史中的游动孢子,而是对上述塔玛亚历山大藻所释放出来的微小近球形的游动生物体的更加形象的说法。本文结果如下:
(1)制作微流控芯片用于塔玛亚历山大藻的培养和“游动孢子”的富集。在微流控芯片上对塔玛亚历山大藻细胞进行连续记录,观察到塔玛亚历山大藻细胞的厚壁孢囊释放“游动孢子”的现象,每个厚壁孢囊对于“游动孢子”的释放量不等,最高可达50个;同时在微流控芯片上记录了“游动孢子”的二分裂过程。
(2)塔玛亚历山大藻起始密度越低,厚壁孢囊的生长越缓慢,最大生长量出现时间也越晚,不同稀释浓度下厚壁孢囊的最大生长点总是出现在塔玛亚历山大藻最大生长点之后的2-4天。
(3)不同培养基浓度下塔玛亚历山大藻和“游动孢子”的记数发现,塔玛亚历山大藻的最适生长培养基浓度为100%的f/2培养基,而“游动孢子”的最适生长培养基浓度则为10%的培养基浓度。强光刺激以及渗透压改变都会促使厚壁孢囊裂解,从而释放“游动孢子”。
(4)使用改进后的低速离心收集未脱水的方法处理“游动孢子”样品,拍摄扫描电镜,对“游动孢子”的形态有个清晰的了解:细胞近似圆形,大小为2-4μm;顶部具有两根不等长的鞭毛,长鞭毛是体长的3-4倍,具有茸毛,而短鞭毛是体长的2/3倍,没有茸毛;在鞭毛着生部位正对面有个底孔;底孔附近有个以凹陷起始的纵沟,一直延伸到鞭毛着生处。
(5)提取“游动孢子”的基因组,进行18s rDNA序列扩增,测序,构建游动孢子的SSU-rDNA系统进化树。发现“游动孢子”与金藻门金藻纲色金藻目棕鞭藻科棕鞭藻属的两个种聚在一个分支上,支持率达到95%。
(6)对塔玛亚历山大藻进行记数观察,发现未经过处理的含菌和“游动孢子”的塔玛亚历山大藻相较于处理过的塔玛亚历山大藻会提前进入稳定期和衰亡期,而经过处理的无菌和“游动孢子”塔玛亚历山大藻的生长则更加稳定,不易衰老。