鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道上皮细胞而引起的、对现代养鸡业危害巨大的肠道原虫病,其中以寄生于鸡盲肠的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella,E.tenella）在生产中最常见,危害也最大。柔嫩艾美耳球虫感染鸡后,会通过自身分泌的蛋白逃避或适应宿主免疫系统,在这个过程中,鸡肠道细胞毒性淋巴细胞可通过穿孔素/颗粒酶途径杀灭感染的球虫,而球虫也需要从纳虫空泡中逸出,入侵新的宿主细胞完成增殖从而造成鸡肠道损伤。研究表明穿孔素样蛋白（perforin-like protein,PLP）对于寄生原虫感染宿主具有重要作用。弓形虫PLP能够破坏纳虫空泡膜和宿主细胞膜从而有利于虫体的入侵。目前尚无关于柔嫩艾美耳球虫穿孔素样蛋白（EtPLPs）在球虫感染中的报道。同时,对于宿主抗球虫感染机制的认识仍需完善。本研究首次对全长EtPLPs基因进行了克隆并对EtPLPs进行重组表达及免疫荧光检测,同时分析EtPLP在不同发育阶段的转录水平,进而对球虫感染后肠道免疫系统中颗粒溶素、颗粒酶A和穿孔素的转录水平变化进行了分析。主要研究内容和结果如下:1.本实验首次成功获得EtPLP₁（1932 bp）和EtPLP₂（4215 bp）基因的全长序列;通过表达纯化得到两个大小分别为37 ku和67 ku的目的蛋白,Western Blot结果显示其反应原性良好;通过免疫荧光技术,观察到EtPLP₁定位在子孢子顶端,表明该蛋白可能与虫体入侵与逸出宿主细胞相关。2.采用qRT-PCR检测EtPLP₁和EtPLP₂在艾美耳球虫不同发育阶段基因转录水平。结果显示,mRNA转录水平结果显示,EtPLP₁在子孢子阶段表达量最高,其次是孢子化卵囊阶段,EtPLP₂mRNA水平在第一代裂殖子阶段表达量最高,其次是第二代裂殖子阶段;它们在其它阶段表达量极低或不可检测,这一结果提示,EtPLP₁和EtPLP₂基因分别在E.tenella不同发育阶段差异表达,在入侵和逸出过程中交替发挥作用。3.通过qRT-PCR检测E.tenella感染鸡时穿孔素、颗粒酶A和颗粒溶素在盲肠和小肠组织中mRNA的表达水平。在感染后10 d,与对照组相比,盲肠组织中穿孔素、颗粒酶A和颗粒溶素mRNA的表达量明显增加,差异显著性（P<0.05）,而在小肠组织中三种基因转录量没有明显的变化。结果表明在E.tenella感染组织中,颗粒酶/穿孔素途径在颗粒溶素的介导下在抗E.tenella感染中发挥一定的作用。这些初步结果为进一步研究E.tenella感染过程中艾美耳球虫和宿主的相互作用奠定实验基础。