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目的类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是以关节炎症和骨质破坏为主要特征的自身免疫性疾病,致残率很高,治疗主要依赖于改善病情抗风湿药物的联合使用,目前临床上常用的联合方案很多,不同治疗方案在RA患者中的疗效不同,但这些联合治疗方案在RA治疗中发挥作用的机制尚不完全清楚。近年来的研究已经明确：Thl7与Treg细胞之间的失衡是导致RA发病的重要机制。那么不同联合治疗方案在临床上发挥不同的作用是否与其对Th17与Treg细胞平衡影响的不同呢?关于治疗效果与Th17/Treg关系的研究较少,部分学者曾经对部分单药治疗进行过研究。甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、柳氮磺吡啶(Sulfasalazin, SSZ)、硫酸羟氯喹(hydroxychloroquin, HCQ)、糖皮质激素以及抗TNF-α的联合治疗是否可以调节Th17/Treg平衡以及哪种联合方案能更好的调节Th17/Treg平衡目前尚无定论,在动物实验与临床试验间亦存在差异。本研究旨在了解临床常规治疗方案对外周血IL-17表达的影响,明确治疗效果与Th17/Treg表达的关系,为制定更加有效的治疗方案提供依据。本课题开展了RA动物模型的实验研究,以阐明其联合用药机制。经PUDMED、CNKI、万方等检索,国内外尚未见有类似报道,为RA的治疗提供新思路和方法。本研究通过对RA动物模型,即胶原诱导的大鼠关节炎模型(collagen induced arthritis, CIA)的实验研究,从炎性细胞因子、T淋巴细胞亚群平衡与细胞凋亡的角度,研究临床常规治疗的作用机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导的雄性Wistar大鼠CIA模型,随机分为CIA模型对照组、MTX (2.7mg/kg/w)联合泼尼松组(Pred:5mg/kg/day)、MTX (2.7mg/kg/w)联合HCQ (40mg/kg/day)和SSZ(160mg/kg/day)、MTX (2.7mg/kg/w)联合益赛普组(0.3mg/kg/day),另选8只健康大鼠作为正常对照组。进行21周体内实验,初次免疫后第3周开始给药。治疗过程中连续对大鼠的关节炎症程度进行评分,测量右后肢的踝关节的肿胀程度。治疗21周后全部动物处死,留取大鼠右后肢踝关节,大鼠外周血2ml以及脾脏,大鼠踝关节经固定、脱钙、包埋后,制成切片,外周血经离心留取血清,从脾脏中分离脾单核细胞。然后各组大鼠行HE染色观察踝关节滑膜的组织病理学改变,进一步通过酶联免疫吸附方法测定血清IL-17的水平,同时采用流式细胞技术检测Th17及Treg细胞亚群的数量及其凋亡。结果1.CIA大鼠造模成功率达90.3%(56/62)。2.关节炎指数(AI)：各治疗组AI较模型对照组均有明显改善,MTX联合泼尼松组优于MTX联合羟氯喹和柳氮磺吡啶组及MTX联合益赛普组(P<0.05),3.踩关节肿胀程度：在三个治疗组中,MTX联合泼尼松组的踝关节肿胀程度改善最明显(P<0.05)。4.体重：MTX联合泼尼松组体重较其它各组明显减轻(P<0.05)。5.踝关节病理：CIA模型组大鼠的大量炎性细胞浸润,滑膜增生,排列紊乱软骨、骨组织严重侵蚀；MTX联合羟氯喹和柳氮磺吡啶组滑膜炎症、软骨及骨组织侵蚀有所减轻(P<0.05)；MTX联合泼尼松组和MTX联合益赛普组滑膜炎症、软骨及骨组织侵蚀明显改善(P<0.05)。6.血清IL-17水平在CIA模型对照组大鼠中水平最高,各治疗组大鼠的IL-17水平均较对照组大鼠明显降低(P<0.05)。7.Th17及Treg细胞亚群：(1)在免疫后第10周,各治疗组大鼠脾Treg细胞业群数量较CIA模型对照组增加,同时Treg细胞凋亡减低,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。(2)在免疫后第21周,各治疗组大鼠脾Th17细胞亚群数量较CIA模型对照组减少,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。MTX联合羟氯喹和柳氮磺吡啶组的Th17细胞亚群数量低于MTX联合泼尼松组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.在CIA大鼠模型中：血清IL-17水平增高；Th17细胞亚群增多,凋亡减少,Treg细胞亚群减少,凋亡增多,存在Th17与Treg细胞之间的失衡。2.MTX联合泼尼松治疗方案在改善关节炎指数,踝关节肿胀度,抑制血清IL-17水平,调节Th17/Treg平衡等方面疗效显著,但是比较容易导致骨质疏松,体重减轻。3.甲氨蝶呤联合羟氯喹、柳氮磺吡啶治疗方案在改善关节炎指数,踝关节肿胀度等方面的作用相对较弱,它可以抑制血清IL-17水平、降低Th17细胞亚群的数量,同时增加Treg细胞亚群的数量,调节Th17/Treg的平衡可能是其发挥疗效的机制。4.甲氨蝶呤联合益赛普治疗可以抑制血清IL-17水平,同时减少Treg细胞亚群的凋亡,很可能通过调节Th17/Treg之间的平衡而发挥其治疗RA的作用。5.各治疗组均不通过促进Th17细胞亚群的凋亡来调节Th17/Treg的平衡而发挥治疗RA的作用。6.甲氨蝶呤联合益赛普治疗既可以调节Th17/Treg的平衡又可以抑制血清IL-17水平,不容易导致骨质疏松,因此与本实验中其它各治疗方案相比较,其治疗效果最好。