论文部分内容阅读
目的:利用H2O2处理骨骼肌肌管细胞,得到骨骼肌肌管细胞衰老模型之后运用电刺激模拟运动干预衰老的肌管细胞。实验观察骨骼肌C2C12细胞分化为肌管细胞过程中的变化;H2O2干预骨骼肌肌管细胞的衰老情况;通过电刺激模拟细胞运动再次干预H2O2处理后的骨骼肌肌管细胞来揭示运动对于衰老骨骼肌肌管细胞能量代谢相关指标表达的影响,进而补充关于衰老骨骼肌肌管细胞的相关研究成果。方法:实验一,将骨骼肌C2C12细胞进行复苏后置于DMEM培养基（10%FBS）中进行培养,培养到汇合度70%-80%时,使用0.25%胰蛋白酶消化,然后将细胞转移到分化培养基中,并将分化4天后的肌管细胞用于后续实验;将H2O2在96孔板上用DMEM完全培养液稀释成不同浓度梯度,处理肌管细胞2h后再培养24h,利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒对H2O2处理的肌管细胞进行衰老检测并观察。实验二,将实验细胞分为对照组（C组）、对照电刺激组（CE组）、H2O2处理组（H组）、H2O2处理电刺激组（HE组）,利用RM6240型电刺激仪对体外培养的骨骼肌肌管细胞进行电刺激干预,ATP水平测试盒检测各组ATP水平,Western blot法检测各组骨骼肌肌管细胞PGC-1α蛋白。电刺激的实验设定为电流100μA,频率2.5Hz,脉宽20ms,刺激时长为20min。结果:结果一,骨骼肌肌管细胞在100μmol/L H2O2处理之后,肌管细胞活性同C组相比没有存在差异。衰老造模利用100μmol/L浓度的H2O2处理骨骼肌肌管细胞进行衰老,培养24小时候得到衰老细胞模型。结果二,本实验中H组的ATP水平显著低于未经过处理的C组（P<0.01）;经过H2O2处理再用电刺激处理的HE组的ATP水平显著高于只用H2O2处理过的H组（P<0.01）,同样在经过电刺激处理之后,CE组的ATP表达水平显著高于C组（P<0.01）;H组与C组PGC-1α蛋白表达存在非常显著性差异（P<0.01）;H组和HE组的PGC-1α蛋白表达存在非常显著性差异（P<0.01）,C组和CE组PGC-1α蛋白表达没有显著性差异（P>0.05）。结论:H2O2的干预是促进骨骼肌肌管细胞衰老的一种有效方式。衰老模型的ATP水平表达显著低于对照模型,电刺激模拟运动可以提升骨骼肌肌管细胞的ATP水平表达。衰老肌管细胞的PGC-1α蛋白表达量显著低于对照模型;电刺激模拟运动干预之后,衰老电刺激模型与衰老模型在PGC-1α蛋白表达量出现显著性差异。