论文部分内容阅读
骨是乳腺癌最常见的远处转移部位之一,乳腺癌溶骨性骨转移的发生率约为70％。乳腺癌骨转移不但涉及一般肿瘤转移的共同步骤,还与乳腺癌细胞具有靶向骨转移的特性有关。乳腺癌细胞可以和细胞外基质、内皮细胞、血小板、间质细胞及组织特异性结构发生相互作用。研究表明细胞外基质磷酸糖蛋白SIBLINGs家族(small integrin-bindingligand N-linked glycoproteins,SIBLINGs)及其整合素受体在转移中发挥重要作用。乳腺癌细胞分泌甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP),刺激成骨细胞或基质细胞分泌转录因子kB配基受体激活剂(receptor activator of NF-kBligand,RANKL),通过破骨细胞前体表面的转录因子KB配基受体(receptor activator ofNF-kB,RANK)信号途径,刺激转录因子开始转录,导致破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞,使成骨细胞和破骨细胞间失去平衡,促进了骨吸收作用。
骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)是细胞外基质中的一种高度磷酸化和糖基化的分泌性蛋白,属于SIBLINGs蛋白家族。BSP在肿瘤的黏附、增殖、侵袭、基质降解、免疫反应(炎症和补体逃逸)、血管生成和转移中发挥重要的生物学作用。BSP与整合素αvβ3黏附、激活基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、降解基质,通过活化特定细胞信号通路途径促进肿瘤的迁移。本研究检测BSP、αvβ3、RANK和PTHrP在3株具有不同转移性质的人乳腺癌细胞株的表达；以鸡胚尿囊绒膜(chorioallantoicmembrane,CAM)实验探讨BSP单克隆抗体(monoclonal antibody,Mab)对乳腺癌细胞血管侵袭能力的影响。主要实验结果如下：
1.亲骨转移人乳腺癌细胞(MDA-231BO,BO)的生长速率高于亲代(MDA-231P,231P)和亲脑转移人乳腺癌细胞(MDA-231BR,BR)。
2.细胞免疫组织化学检测结果表明MDA-231P、MDA-231BO和MDA-231BR细胞中BSP、αvβ3和RANK的表达呈阳性,表达部位主要为胞浆。
3.酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果提示MDA-231BO细胞培养上清中BSP和PTHrP的分泌表达量明显地高于MDA-231P和MDA-231BR。
4.逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测表明MDA-231BO细胞中BSP mRNA的表达水平最高,分别是MDA-231P和MDA-231BR细胞的1.58倍,3.54倍。
5.Western-Blotting检测提示MDA-231BO和MDA-231P细胞胞内BSP的表达水平高于MDA-231BR。
6.BSP Mab对MDA-231BO细胞的生长具有特异抑制作用,其抑制率和剂量呈正相关,BSPMab抗体浓度为100μg/ml时最大抑制率为35％±0.8％。
7.BSP Mab能特异性抑制MDA-231BO细胞穿透鸡胚CAM血管内皮细胞和基底膜,抑制效应与抗体浓度呈正相关。当BSP Mab浓度达到100μg/ml时能明显抑制MDA-231BO细胞侵入鸡胚血管。