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固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins, SREBPs)属于核转录因子家族,激活胆固醇和脂类合成与转运的相关基因,对维持体内的脂类平衡至关重要。迄今为止,对于奶牛乳腺上皮细胞中SREBPs或其他核转录因子如PPARy (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)哪个才是最重要的调节子仍有争论。mTOR (the mammalian target of rapamycin)是蛋白合成和细胞增殖的关键调节子,最近研究表明mTORC1能够调节SREBP1促进脂类合成。然而,SREBP1对mTOR在乳脂合成中的影响至今没有相关报道。本实验旨在确定奶牛乳腺上皮细胞SREBP1在乳脂合成中的作用及SREBP1对mTOR表达影响。通过研究SREBP1基因过表达和基因沉寂对乳脂合成影响实验,鉴定SREBP1在乳脂合成中的功能。实验通过添加硬脂酸和血清检测对SREBP1表达影响及对乳脂合成影响,确定硬脂酸和血清是否通过调节SREBP1从而调节乳脂合成,进一步阐明SREBP1对乳脂合成能力的影响。实验部分使用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测乳脂合成相关基因SREBP1, ACC, FAS, SCD, m-TOR, FABP3, PPARγ mRNA的表达；蛋白质免疫印记(Western Blotting)方法检测SREBP1, p-SREBP1, mTOR, p-mTOR蛋白表达；免疫荧光法(IF)检测SREBP1, p-mTOR表达定位情况：脂滴染色检测细胞脂滴含量：甘油三酯试剂盒检测细胞分泌甘油三酯含量。实验结果表明(1) SREBP1过表达后,SREBP1, ACC, FAS, SCD, m-TOR, FABP3基因表达显著增加(p<0.01),PPARy无显著变化(p>0.05)：SREBP1, p-SREBP1蛋白表达显著升高(p<0.01),mTOR和p-mTOR蛋白表达量无显著变化(p<0.05)；IF方法检测SREBP1表达量都显著升高(p<0.01),p-mTOR表达量升高不显著(p<0.05)：脂滴含量与甘油三醋含量显著升高(p<0.01)。(2)SREBP1基因沉寂后,SREBP1, ACC, FAS, SCD, FABP3基因表达显著下降(p<0.01),m-TOR, PPARγ无显著变化(p>0.05)；SREBP1, p-SREBP1和mTOR蛋白表达量都显著降低(p<0.01),p-mTOR变化不明(p<0.05)：IF方法检测SREBP1和p-mTOR表达量都显著降低(p<0.01)；脂滴含量与甘油三酯含量显著降低(p<0.01)。(3)添加硬脂酸和血清后,SREBP1, ACC, FAS, SCD, m-TOR, FABP3 mRNA表达水平显著升高；SREBP1, p-SREBP1, mTOR, p-mTOR蛋白表达水平在D+S+B,D+B,D+S组中都升高,而在D+S+B组中升高最显著(p<0.01)；IF方法检测SREBP1和p-mTOR表达量在各处理组中都显著升高(p<0.01)；甘油三酯的分泌与脂滴的形成显著增加(p<0.01)。本研究结果表明SREBP1是乳脂合成中的关键调节子,对乳脂合成具有正性调节作用,硬脂酸和血清作为营养物质可以促进SREBP1基因表达并增强奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成能力,本研究也为建立奶牛上皮细胞泌乳模型提供依据。