禽流感(avian influenza,AI)是由A型禽流感病毒（AIV）引起的禽类传染病。高致病性禽流感不仅可以引起家禽的大量感染，还可以跨越种间屏障感染人类和其他哺乳动物,禽流感的这种流行威胁已经引起人们的广泛关注。作为RNA病毒，AIV突变频繁，表面蛋白的突变和重组使得病毒可以逃避宿主的免疫系统。因此准确的对禽流感进行亚型确定是防控禽流感的关键，目前WHO推荐的AIV亚型鉴定方法是血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验。但是在神经氨酸酶试验过程中，操作起来较为繁琐且不容易掌握。本研究旨在借助已有的蛋白芯片工作平台，研制可以鉴别诊断N1和N2亚型的禽流感神经氨酸酶抗体的蛋白芯片检测方法。本实验使用杆状病毒表达系统表达禽流感病毒的神经氨酸酶N1蛋白和N2蛋白。首先使用RT-PCR方法获得N1和N2基因，先后构建两段基因的重组转移载体和和重组穿梭载体，转染sf9昆虫细胞之后表达得到N1蛋白和N2蛋白。经过western blot分析条带大小正确，神经氨酸酶试验结果为阳性，可知真核表达的N1和N2蛋白具有神经氨酸酶活性。随后，使用此蛋白作为点样样品，初步建立可以鉴别N1和N2亚型神经氨酸酶抗体的蛋白芯片。并进一步对蛋白芯片的作用条件进行了优化，使用此蛋白芯片对N1和N2亚型的禽流感病毒免疫血清进行检测，结果准确。对实验室保存的多个亚型禽流感免疫血清和20份现地免疫血清样品进行检测，结果与神经氨酸酶抑制试验符合率为100%。利用此蛋白芯片对SPF鸡的血清、新城疫病毒免疫血清和传染性法氏囊病毒免疫血清检测结果均为阴性，说明所制作蛋白芯片具有特异性和准确性。该方法提供了一种有效的神经氨酸酶亚型鉴定方法，它将神经氨酸酶亚型鉴定的试验从传统的两天时间缩短到短短的几个小时，这样大大提高了试验效率。操作起来简单方便，并且避免了试验中有毒试剂和NA各亚型特异性血清的使用，该方法对实验室免疫血清和现地血清样品的检测结果与神经氨酸酶抑制试验结果一致，说明使用蛋白芯片应用于现地样品检测是可行的。下一步通过表达添加其他亚型的蛋白，将可以实现对N1-N9各亚型神经氨酸酶同时鉴别检测。