【摘 要】
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乳房炎对山羊产业造成了一定的经济损失。乳房炎特别是隐性乳房炎的早期诊断在山羊乳房炎预防和治疗工作中具有重要意义。抗菌肽S100A7具有快速诱导合成和分泌,对病原微生物敏感等优势,因此是一种潜在的山羊乳腺炎早期诊断标志。而且,抗菌肽S100A7是机体合成的一类小分子多肽,属于非特异性免疫系统的固有组成成分,除广谱抗微生物活性外,还参与免疫调节,几乎无耐药性。近年来,抗菌肽S100A7在预防和治疗山羊
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:31772818);
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乳房炎对山羊产业造成了一定的经济损失。乳房炎特别是隐性乳房炎的早期诊断在山羊乳房炎预防和治疗工作中具有重要意义。抗菌肽S100A7具有快速诱导合成和分泌,对病原微生物敏感等优势,因此是一种潜在的山羊乳腺炎早期诊断标志。而且,抗菌肽S100A7是机体合成的一类小分子多肽,属于非特异性免疫系统的固有组成成分,除广谱抗微生物活性外,还参与免疫调节,几乎无耐药性。近年来,抗菌肽S100A7在预防和治疗山羊乳房炎中的作用越来越受到关注。但是,抗菌肽S100A7与山羊乳房炎发病之间的相关性尚不明确,抗菌肽S100A7在山羊乳腺上皮细胞中的表达以及是否能被病原微生物诱导表达参与乳腺固有免疫反应尚有争论。本研究优化山羊乳汁体细胞总RNA的提取方法,研究健康山羊、亚临床型乳房炎和临床型乳房炎山羊乳汁体细胞抗菌肽S100A7的差异表达及其与乳腺炎发病的相关性,并利用体外培养的山羊乳腺上皮细胞进一步探究抗菌肽S100A7在山羊乳腺上皮细胞中的表达规律及其表达调控机理。主要结果如下:(1)优化山羊乳汁体细胞总RNA的提取方法,提取的总RNA质量良好,经RT-PCR检测,可扩增内参基因GAPDH和目的基因S100A7。(2)健康山羊乳汁体细胞数最少,疑似亚临床型乳房炎山羊,亚临床型乳房炎山羊和临床型乳房炎山羊乳汁体细胞数依次增多,且健康山羊和亚临床乳房炎山羊、临床型乳房炎山羊之间均有显著性差异。(3)抗菌肽S100A7在健康山羊乳汁体细胞中表达量最低,疑似亚临床型乳房炎山羊,亚临床型乳房炎山羊和临床型乳房炎山羊乳汁体细胞数中抗菌肽S100A7表达量依次上升,山羊乳汁体细胞中S100A7的表达量随着乳房炎临床症状的严重程度上调。山羊乳汁体细胞中S100A7 mRNA的表达水平与乳腺炎具良好相关性,在一定范围内能反映乳房炎发病的严重程度。(4)在健康山羊和乳房炎山羊中,抗菌肽S100A7在乳头管表皮层,乳头皮肤表皮层,乳头腺体,乳头腺体导管,乳腺腺泡上皮细胞和导管中均表达,且乳房炎乳腺组织中乳腺腺泡上皮细胞S100A7的表达显著高于健康山羊乳腺组织。(5)分离培养山羊乳腺上皮细胞,细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导山羊乳腺上皮细胞合成和分泌抗菌肽S100A7,且具有LPS处理浓度和处理时间依赖性。但是,单独LPS处理不能诱导体外培养GMECs S100A7蛋白的持续分泌。(6)LPS诱导TLR4基因和My D88基因的mRNA表达水平上调,激活p-65蛋白,从而激活GMECs的TLR4/NF-κB信号通路。综上所述,本研究发现山羊乳汁体细胞中S100A7 mRNA的表达水平与乳腺炎具良好相关性,在一定范围内能反应乳房炎发病的严重程度。抗菌肽S100A7在山羊乳腺上皮细胞中的表达,并且能被LPS诱导表达和分泌。LPS可能是通过TLR4/NF-κB信号通路调控参与调控抗菌肽S100A7的表达和分泌。
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