硫酸铍诱发人胚肺细胞凋亡机制及枸杞多糖保护作用的初步研究

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目的:用体外实验的研究方法,观察硫酸铍(BeSO4)致人胚肺成纤维细胞(MRC-5)活性氧(ROS)的变化、相关凋亡基因c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3的表达水平及细胞内钙离子浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的改变,探讨硫酸铍是否通过影响活性氧和钙离子导致人胚肺细胞损伤,同时观察枸杞多糖(LBP)是否对硫酸铍致人胚肺细胞损伤具有保护作用。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞,共分为空白对照组、硫酸铍低中高剂量组、枸杞多糖保护组及枸杞多糖对照组等6组。硫酸铍给予剂量分别为0、1、10、100μmol/L,枸杞多糖剂量为10μmol/L。细胞生长至对数生长期,根据实验需求,达到细胞密度后,加入药物培养24h收集细胞,分别进行以下实验:1.流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS);2.免疫组化(SP)法检测c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3相关的表达3.激光共聚焦法检测细胞内[Ca2+]的水平;4.RT-PCR测定三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达。结果:1.BeSO4中、高剂量组ROS含量与空白对照组相比明显增高,表达细胞数增多,具有统计学意义(P<0.05)。2.细胞加药培养24h后,免疫组化结果显示: BeSO4低、中、高剂量组c-fos、bcl-2表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且随着药物剂量增加表达水平不断增高。BeSO4中、高剂量组bax表达均低于空白对照组、BeSO4低、中、高剂量组Caspase-3表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)且随着药物剂量增加表达水平不断降低。3.硫酸铍高剂量组细胞内Ca2+浓度明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.激光共聚焦显微镜下,100μmol/L BeSO4组中,细胞核呈现出明亮的绿色荧光,细胞分界清楚呈梭型,BeSO4+LBP组细胞呈圆形,胞体淡绿色,细胞周围可见绿色荧光小点。5. BeSO4低、中、高剂量组Ⅲ型IP3R表达与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);6. LBP对BeSO4损伤细胞的保护作用:BeSO4组ROS含量高于空白对照组(P<0.01)、LBP组ROS含量低于空白对照组(P<0.01),二者具有交互作用(P<0.05)。对于bcl-2、Caspase-3的表达BeSO4和LBP具有交互效应(P<0.05或P<0.01)。Ca2+和IP3R检测结果显示BeSO4和LBP具有交互作用(P<0.05或P<0.01)。结论:1. BeSO4可致MRC-5细胞内ROS含量升高,LBP对此有一定保护作用。2. BeSO4可致MRC-5细胞内的c-fos、bcl-2基因表达量升高;bax、Caspase-3基因表达量减少,LBP对此有一定的调节作用。3. BeSO4可致MRC-5细胞内钙离子浓度升高,LBP对其有一定保护作用。4. BeSO4可能通过IP3R受体通道,造成MRC-5细胞钙超载,LBP对IP3R受体的表达有一定的调节作用。
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