研究目的在分子水平上初步探讨我国大陆地区乳汁中HCMV病毒的流行情况以及流行株的基因特征与分子进化规律,为我国母乳库安全,HCMV疫情的监测、相关疾病的诊断与防控以疫苗研究提供基础数据。研究方法对2017-2018年北京、重庆和内蒙古三地区母乳样标本提取核酸通过Real-time RT-PCR方法确定HCMV核酸阳性率,进而通过Nest-PCR对靶基因gB糖蛋白扩增测序,测序结果使用MEGA和BioEdit软件进行亲缘性关系树的构建、基因型分布及基因特征分析。研究结果1 三个地区共获得510份母乳样本,RT-PCR检测出46.4%捐赠母乳样本和59.2%早产儿母乳样本对HCMV DNA均呈阳性反应,北京、重庆和内蒙捐赠母乳样本HCMV DNA 阳性率分别为75%,57.5%和29.%。早产儿母乳样本的HCMVDNA阳性率分别为54.2%,69.6%和67.2%。大部分母乳样本的CT值在31-36之间,样本中HCMV DNA的病毒载量约为103-104拷贝/ml。2 根据糖蛋白B(gB)基因299-305bp,在母乳样本中鉴定出3种HCMV基因型,分别为 67.3%gB1、6.8%gB2、23.9%gB3、2%gB1 和 gB1 和 gB3 混合基因型。三地区HCMV基因型分布差异不大,均以gB1基因型为主,北京和内蒙HCMV的3个基因型都检测出来,但重庆没有检测出gB2型。3 捐献母乳样本和早产儿母乳样本中也都有3种基因型,捐赠母乳样本中79.4%gB1、4.4.%gB2 和 16.3%gB3,早产儿母乳样本中 61.3%gB1、8.0%gB2、27.7%gB3、2.8%gB1和gB3混合基因型,捐赠母乳样本和早产儿母乳样本的主要基因型都是gB1基因型,但仅在早产儿母乳样本的4例母乳中发现了 gB1和gB3基因型混合感染。4 对205份乳汁中HCMV的核苷酸和氨基酸序列同源性分析,HCMVgB靶基因序列之间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为76.8%-100%和55.6%-100%。gB1、gB2和gB3靶基因序列之间的核苷酸同源性分别为94.0%-100%、98.6%-100%和92.7%-100%。gB1、gB2和gB3靶基因序列之间的氨基酸同源性分别为91.7%-100%、97%-100%和83.5%-100%。挑选其中氨基酸和核苷酸差异较大的57条序列进行核苷酸和氨基酸变异情况分析。45-47位点的gB1碱基分别为CTA,gB2和gB3在这三个位点碱基缺失,69-71位点gB1和gB2碱基分别为GAT和AGT,而gB3在这三个位点碱基缺失。5 亲缘性基因进化树分析发现乳汁中三种HCMV基因型年代分布无显著性差异,捐赠母乳样本和早产儿母乳样本在系统发育进化树中位置也无显著性差异,同时进化树显示gB1基因型差异较大。按全球序列gB1基因型可分为3个分支。1分支包括来自德国、英国、以色列、澳大利亚、美国、希腊、比利时和中国序列。2分支和3分支主要包括来自中国、埃及和美国HCMV序列。基因型gB2和gB3在中国、德国、捷克、意大利、韩国、美国、法国和荷兰等国家均存在。研究结论本研究首次阐明了我国中国北京、内蒙和重庆三地区母乳中HCMV感染情况,初步分析我国母乳库中捐赠乳汁样本HCMV核酸阳性率略低于早产儿母乳样本,且乳汁中HCMV病毒载量较低,以及鉴定了流行三地区HCMV病毒株的基因特征、遗传多态性和动态变异变迁规律,进一步积累并丰富了我国HCMV病毒学监测数据库,为我国母乳库安全性提供重要保障,为HCMV的防控以及疫苗研发提供了重要科技支撑。图16 表17 参考文献124。