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植物内生真菌(Endophytic fungi)是指在某一时期生活在健康植物体内,对宿主植物组织不引起明显病害症状,并与宿主植物建立和谐关系的一类真菌。植物内生真菌长期生活在植物体内,与宿主协同进化,二者形成互利共生的关系。内生真菌能产生多种生长调节物质刺激宿主植物的生长发育,增强宿主植物对生物及非生物胁迫的抗性。植物内生真菌的次生代谢产物结构类型丰富且多数具有生物活性,是寻找新型天然产物的重要资源。
拟茎点霉属(Phomopsis)真菌属腔孢菌纲,具有两型分生孢子。该属的多数种类为重要的植物病原菌,多侵染草本和木本植物的叶、枝和果,部分种类为重要的植物内生真菌。由于形态的特殊性和对农林业的重要性,该属真菌一直是真菌学研究的重要类群。
本论文对分别分离自滇牡丹和印楝植物的两株内生真菌PSll-1和YD171进行了初步的鉴定和次生代谢产物的研究。培养菌落的形态特征和两型分生孢子以及ITS序列的测定和分析,表明这两株真菌均为拟茎点霉属(Phomopsis)真菌。分别对两株菌进行扩大发酵,利用溶剂萃取法获得发酵提取物,通过多种柱色谱分离法对发酵提取物进行分离纯化,并综合运用现代波谱技术(MS、1D-NMR、2D-NMR、X-Ray、IR、UV等)对分离获得的单体化合物进行结构鉴定。从菌株PSll-1的发酵产物中分离鉴定了6个化合物,均为含有多氧取代环己烯结构单元的聚酮类新化合物,分别命名为phomopoxidesA-F(1-6),该类化合物为首次从拟茎点霉属真菌中分离获得。从菌株YD171的发酵产物中分离获得4个麦角甾醇类化合物和一个苯酞,分别为ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(7), calvasterol A(8), calvasterol B(9),9α,14β-dihydroxyergosta-4,7,22-triene-3,6-dione(10),7-methoxy-4,6-dimethyl phthalide(11),其中化合物10为麦角甾醇类新化合物。对其中部分化合物进行了抗菌活性的初步检测,结果显示,从菌株PS11-1的发酵产物中分离获得的化合物1-6对三株指示菌白色念珠菌(Candida albicans)、稻瘟霉(Pyricularia oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)具有一定的抑菌活性,最小抑制浓度在50-400μg/ml之间。从菌株YD171的发酵产物中分离获得的化合物8和10在200μg的测定剂量下分别对稻瘟霉(P.oryzae)和白色念珠菌(C.albicans)有一定的抑菌活性。