本文探讨以特异性抗原抗体结合反应为基础的蛋白芯片技术,建立高选择性、高灵敏度、高通量的定性/定量测定人体液中特定血红蛋白类制品的新型检测方法。 用Westren-blot方法和采用固定相—血红蛋白—抗血红蛋白抗体模式的抗原芯片方法测定抗猪血红蛋白聚合体抗体与人或牛血红蛋白聚合体、人血红蛋白单体和人血浆交叉反应特性,以了解相应抗体作为体液中相应动物源性血红蛋白类氧载体测定方法的检测抗体的质量优劣性;以戊二醛聚合猪血红蛋白为例,研究抗原芯片和抗体芯片方法定量测定血红蛋白样品的特性;采用抗原芯片和抗体芯片分别进行人血浆、尿液对检测方法的干扰研究,并建立在人体液中定性/定量测定血红蛋白类制品的检测方法;将所建立的蛋白质芯片方法于戊二醛聚合猪血红蛋白在大鼠体内药代的应用进行了可行性研究。 所测抗猪血红蛋白抗体不识别人或牛血红蛋白聚合体、人血红蛋白单体和人血浆蛋白。本蛋白芯片方法测定戊二醛聚合猪血红蛋白线性关系良好,线性范围一般在1-12μg/mL,检测限度为0.0005g/L;同一实验不同玻片平行测定结果有一定差异,合并不同玻片数据可明显提高测定质量,但是同样样品不同批实验结果重复性差、无固定关系。利用抗原芯片进行人体液中戊二醛聚合猪血红蛋白线性效果好,线性范围一般在50-600μg/mL,检测限度为0.025g/L;抗体芯片方法线性关系较差,但检测方法受体液干扰小,其灵敏度可达0.0005g/L。蛋白质芯片在戊二醛聚合猪血红蛋白的大鼠体内药代实验应用效果良好,用抗体芯片方法可以检测出其在大鼠体内代谢10-12个半衰期的血清样品为阳性。 所检测的抗猪血红蛋白抗体的质量很高,适用于抗原抗体法测定人体液中猪血红蛋白类物质。用抗原芯片可对特定血红蛋白进行高特异性、高通量的定量检测,而抗体芯片方法可对特定血红蛋白进行高灵敏度的定性检测。蛋白质芯片方法可以作为血红蛋白类制品的药代动力学检测方法。