论文部分内容阅读
目的：β1，3—N—乙酰氨基葡萄糖基转移酶8（β3GnT8）即β3GalT7是本实验室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶，通过同源序列比对确定其属于β3糖基转移酶大家族。有学者报道，β3GnT2和β3GnT8（GalT7）能够在体外形成异二聚体，此复合物的催化活性比两者各自的酶活性显著增强。本文旨在对不同白血病细胞株中β3GnT2和β3GnT8（GalT7）的表达变化，探究两者在白血病中的功能相关性。
方法：
1．采用RT—PCR技术，在8种白血病细胞株及24例白血病病人骨髓有核细胞中检测β3GnT8（GalT7）、β3GnT2，mRNA水平的表达，以10例正常成人骨髓有核细胞作相对正常对照。
2．构建β3GnT8（GalT7）的RNA干扰真核表达载体并得到稳定的β3GnT8（GalT7）基因敲减细胞株。
3．利用RT—PCR和Western blot分别分析细胞株转染前后β3GnT8（GalT7）、β3GnT2在mRNA水平和蛋白水平的表达变化。
结果：
1．β3GnT8（GalT7）在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937细胞和18例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达，在KG1，Raji细胞和相对正常对照中没有表达；β3GnT2在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937、Raji细胞、4个相对正常对照和16例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达，在KG1细胞中和6个相对正常对照中没有表达。
2．成功构建β3GnT8（GalT7）的RNA干扰真核表达载体。
3．RT—PCR和Western blot结果显示的β3GnT8（GalT7）和β3GnT2的mRNA和蛋白表达都随着β3GnT8（GalT7）的表达下降而抑制。
结论：实验显示，β3GnT2和β3GnT8（GalT7）在不同白血病细胞株中有不同程度的表达，提示β3GnT8（GalT7）基因的过表达从而使β3GnT2活性大大增加最终导致恶变细胞中聚乙酰半乳糖胺增多，而促进其浸润转移。β3GnT8（GalT7）和β3GnT2在白血病甚至肿瘤的浸润、转移中的作用具有一定的相关性。