小麦TaBEIII基因的克隆及淀粉合成相关基因在籽粒发育期的表达分析

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淀粉分支酶(Branching enzyme,BE)将α-1,4-葡聚糖直链供体切开,再通过α-1,6-糖苷键将断裂的部分重新连接起来,产生分支结构。在高等植物中BE具有物种特异性,一般分为三种类型:BEⅠ,BEⅡ和BEⅢ。本研究利用cDNA末端快速扩增方法(Rapid-amplificationof cDNA ends,RACE),首次克隆出小麦BEⅢ基因(命名为TaBEⅢ)的cDNA全长,其长度为3780bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为2748bp,编码916个氨基酸。TargetP软件预测结果表明,TaBEⅢ蛋白定位于质体,5端包含一个由93个氨基酸组成的前导序列,并含有BEⅢ蛋白的特征:四个高度保守区和一个(α/β)8桶状区。  本研究在普通小麦中辨析出26个淀粉合成相关基因的cDNA序列,和一个负向调控淀粉合成相关的转录因子(Starch Regulatorl,TaRSR1),通过荧光定量PCR测定它们在小麦籽粒发育期间的转录水平,用以分析小麦籽粒淀粉合成的机制。根据这26个基因在小麦籽粒发育期间的的转录情况可分为三类:第一类主要在籽粒发育早期表达,它们可能对早期籽粒胚乳细胞机械组织的构建、淀粉粒最初的形成有重要作用;第二类主要在籽粒发育的中期和后期高表达,这类基因的表达谱与淀粉积累速率的趋势十分相似,因此推测此类基因在籽粒淀粉合成中发挥重要作用;第三类在整个籽粒发育期表达量都很低,推测它们可能与籽粒内的临时淀粉合成有关。转录因子(TaRSR1)在早期和后期表达量较高,而在中期表达量低,它在籽粒发育期的表达水平与第二类基因的表达呈显著负相关,表明TaRSR1可能在籽粒发育整个期间负向调控第二类淀粉合成基因的表达,在淀粉合成中发挥重要的调控作用。
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