稻瘟菌插入突变体库的构建及生长缓慢突变体的筛选

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丝状真菌稻瘟菌(Magnaporthe grisea)可以引起水稻病害,而且是研究病原真菌的模式菌。获得与稻瘟菌中菌丝生长相关的基因为稻瘟菌的功能基因组研究提供了材料,为在分子生物学和分子遗传学上阐述稻瘟菌致病机理有着重要的意义。为此,作者开展了本研究。   一定规模的稻瘟菌插入突变体库可以为本研究提供必要的研究材料。作者利用根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)方法构建了包含5090个P131转化子,4310个guy11转化子的稻瘟菌插入突变体库,并且使转化效率到达了约700~1200个转化子/106个孢子。   作者筛选野生型稻瘟菌P131的ATMT插入突变体库获得了17个表型为生长缓慢型P131的突变体。通过有性杂交证明10个突变体的突变表型与插入标记是共分离的。进一步测定其中部分突变体产孢量低于野生型稻瘟菌P131,部分突变体侵染钉、附着胞、侵染菌丝形成率降低,部分突变体对水稻丽江黑谷的致病力有不同程度的下降,但是十个突变体都没有致病性方面的差异。   随后,作者通过质粒拯救和TAIL-PCR方法获得了突变体mvc5、mvc7、mvc8的侧翼序列,BLAST分析表明在mvc5、mvc7、mvc8中插入位点可能分别落在了基因MGG02843.5、MGG05629.5、MGG12252.5的编码区上,编码产物分别为一个核酸外切酶的小囊泡复合体、一个锚定蛋白重复序列介导的蛋白和一个动力蛋白GTPase。另外作者正在进行其他突变体侧翼序列拯救,这些都为克隆该类基因奠定了基础。
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