研究背景：急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)是发病率和死亡率极高的心血管疾病,严重危害着人类健康。其是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂,继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征。易损斑块破裂是ACS发生最重要的始动环节,近年来大量研究证实各种因素所致的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)激活,导致细胞外基质降解是导致易损斑块破裂的主要原因之一新近大量研究发现酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase, ASMase)与动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发生发展密切相关。ASMase通过水解鞘磷脂(Sphingomyelin)生成神经酰胺(Ceramide),诱导平滑肌细胞凋亡,增加低密度脂蛋白的相互聚集,促进泡沫细胞的形成等病理变化,参与了AS发生发展的多个环节。但目前尚无文献报道其是否通过影响斑块的稳定性,从而在ACS的发病过程中起着重要作用。MMPs的激活与斑块的稳定性密切相关,而最新研究发现ASMase可能介导了炎症因子刺激的MMPs过表达过程,因此本研究首先在临床ACS患者中探讨ASMase与其发病的相关性,在此基础上,再从细胞水平进一步研究ASMase是否通过介导MMPs的过表达从而影响斑块的稳定性,最终导致ACS的发生。第一部分血浆ASMase活性,Ceramide水平与冠状动脉粥样斑块稳定性研究目的：探讨ASMase活性,Ceramide水平与冠状动脉粥样斑块稳定性之间是否相关。方法：共纳入212名冠心病(coronary artery disease, CAD)患者及52名健康体检者,所有研究对象分为三组,急性冠脉综合征组(ACS)[14名,稳定型心绞痛组(SAP)98名和正常对照组(Control)52名。采用化学发光法检测血浆中Sphingomyelin水平；采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatographic assay, HPLC)检测血浆中ASMase活性；采用质谱-液相色谱联用分析法(LS-MS)检测血浆Ceramide水平；采用酶联免疫法(ELISA法)检测血浆中MMP-9,肿(?)坏死因子alpha (tumor necorsis factor alpha, TNF-α)水平。比较不同类型冠心病及正常对照组血浆中ASMase活性,Sphingomyelin, Ceramide, MMP-9, TNF-α水平变化,并进行相关性分析。结果：(1)ACS组与SAP组患者血浆Sphingomyelin水平高于正常对照组(P<0.01),但ACS组血浆Sphingomyelin水平与SAP组相比,无统计学差异(P>0.05)。(2)ACS组与SAP组患者血浆ASMase活性、Ceramide水平高于正常对照组(P<0.05),且ACS组高于SAP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ACS组患者MMP-9水平高于SAP组与正常对照组(P<0.05),而SAP组血浆MMP-9水平与正常对照组相比无统计学差异(P>0.05)。(4)ACS组与SAP组患者血浆TNF-α水平高于正常对照组(P<0.05),且ACS组高于SAP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)ACS患者血浆ASMase舌性与血浆Ceramide水平相关,且二者均与MMP-9, TNF-α水平相关,与Sphingomyelin水平无关。结论：血浆ASMase活性,Ceramide, MMP-9及TNF-α水平与冠状动脉粥样斑块的稳定性相关,测定血浆ASMase活性有助于确定具有不稳定斑块的ACS高危人群。第二部分ASMase介导TNF-α诱导的巨噬细胞MMP-9表达目的：探讨ASMase是否介导了TNF-α诱导的巨噬细胞MMP-9表达。方法：(1)研究TNF-α处理对巨噬细胞酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase),MMP-9表达及Ceramide水平的影响。实验分组：对照组和不同浓度的TNF-α组(用含10ng/ml,30ng/ml,100ng/ml TNF-α的培养液孵育巨噬细胞24h)。采用Real-Time PCR及Western-blot法分别从基因及蛋白水平检测ASMase,MMP-9表达,用LS-MS法检测Ceramide水平.(2)研究ASMase抑制剂desipramine预处理对TNF-a诱导巨噬细胞MMP-9表达及Ceramide水平的影响。实验分组：空白对照组：用含1%小牛血清的高糖DMEM培养液孵育巨噬细胞24h; TNF-α组：用含100ng/ml TNF-α的培养液孵育巨噬细胞24h;+desipramine组：用5μMdesipramine (ASMase抑制剂)孵育细胞120min后,加入终浓度为100ng/ml的TNF-α培养液孵育巨噬细胞24h,采用Real-Time PCR及Western-blot法分别从基因及蛋白水平检测MMP-9表达,用LS-MS法检测Ceramide水平。结果：(1) TNF-α (10ng/ml,30ng/ml,100ng/ml)呈浓度依赖性地增加ASMase, Ceramide的水平及MMP-9的表达。(2)与对照组相比,TNF-α (100ng/ml)处理巨噬细胞24h显著升高细胞Ceramide水平(P<0.05),上调MMP-9的表达(P<0.05),ASMase抑制剂desipramine预处理可显著抑制TNF-α的上述作用(P<0.05)。结论：ASMase介导了TNF-α诱导的MMP-9表达,ASMase可能通过激活MMP-9,降低斑块稳定性,导致ACS的发生。