不结球白菜对棉疫病菌非寄主抗性相关基因的筛选和功能分析

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxyxwxx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究就不结球白菜对棉疫病菌非寄主抗性相关基因的筛选和其中一个过敏性细胞死亡过程中上调表达的基因BcLCB2的功能进行了研究。采用抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)的方法筛选疫霉菌激发子PB90注射处理不结球白菜叶片5h内上调表达的基因。激发子PB90从棉疫病菌Phytophthora boehmeriae中获得。测定分析了200个PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期上调表达的cDNA片段,生物信息学分析表明它们包含70个上调表达的基因,共分为9类:基本能量或代谢生产;蛋白质合成分解;细胞信号传导机制;细胞凋亡;转录;细胞运输和编码未知功能的蛋白等。进一步采用半定量RT-PCR分析了候选基因beclin,thioredoxin,HLA-B,MAP3K SPT1,SPT2和AGO1,表明这7个基因在PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期上调表达。构建了疫霉菌激发子PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期抑制性差减杂交cDNA文库,鉴定了70个上调表达的基因,并对其中7个基因的可能功能进行预测分析,这些基因的挖掘为进一步阐明过敏性细胞死亡的分子机制提供了素材。本文采用RACE从Phytophthora boehmeriae激发子PB90诱发不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis)早期过敏反应上调表达的基因中获得一个的编码丝氨酸棕榈转移酶亚基的基因BcLCB2,该基因在花和茎中的表达量比叶和根高。采用农杆菌介导的瞬时过量表达法证明BcLCB2在烟草叶片中过量表达可抑制PB90、elicitin、MgNep1(来源于稻瘟菌)、hrflxoo(来源于水稻白叶枯病菌)等4种激发子和动物促凋亡蛋白Bax诱导的烟草过敏反应。DAB染色结果表明BcLCB2过量表达时,H2O2累积量减少。进一步以激发子处理通过病毒诱导基因沉默技术沉默了NbLCB2的本氏烟叶片,发现该基因的沉默加快了激发子诱导的过敏反应。本文还观察到在烟草与青枯菌(Ralstonia solanacearum)亲和互作中,BcLCB2的过量表达明显抑制了病斑的扩展。BcLCB2也可抑制Bax引起的酵母细胞凋亡和抑制凋亡时活性氧的积累;BcLCB2在酵母中表达还可提高酵母细胞对氧化剂的耐受性。上述结果表明BcLCB2是激发子诱发的烟草过敏性细胞死亡和亲和互作中的细胞死亡及Bax诱发酵母细胞凋亡的一个负调控因子,可能通过抑制活性氧的积累来抑制细胞死亡;同时结果还提示植物的过敏性细胞死亡和酵母的细胞凋亡具有保守的调控机制。
其他文献
“树木好厉害呀,有这么多用处!”小伙伴们纷纷感叹。  “是啊,太神奇了!可是。我们见到的大都(dū)是大树。这些树是怎么长大的呢?”外福来又开始转动他的小脑瓜儿了。  种子去旅行  “树都是由种子发育而来的。一棵树产生的种子数量非常巨大,但只有很少的种子能长成树。种子生长需要充足的水分、阳光和适宜的温度。如果种子落在了大树的树荫下,那就很难生长。所以,很多种子借助外力搬到更适宜的环境中:有的种子的
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种具有高度特异性,对环境友好的微生物杀虫剂,其cry基因也是应用最为广泛和最有潜力的抗虫基因。本试验从山东省土壤中分离Bt菌株,
所有植物都包含叶绿素,叶绿素使得植物变绿。为了观察,我们可以把叶绿素提取出来。实验完成以后,写一篇实验报告。  你需要:装有半杯外用酒精的干净玻璃杯,一片新鲜的叶子。  第一步:如果把叶绿素从叶子中提取出来放在酒精里,它会是什么颜色?写下你的假设。  第二步:先观察一下叶子,然后把它放进装有酒精的玻璃杯里。每隔一个小时检查一下叶子。放置一个晚上。  第三步:第二天检查一下叶子。  第四步:把每次观
“那边有一棵树。好大呀,咱们几个去试试能不能抱住它!”一个,两个,三个,最终三个人手拉手合起来才勉强抱住。可真是大呀!  “这算什么!”乐乐不屑地说,“世界上最大的树比这大多了,还有果实可以爆炸的炸弹树……好多奇葩树呢。”  可以爆炸的炸弹树  在墨西哥有一种树叫炸弹树。它的果实和柚子差不多大小,每当果实成熟时便会自动爆炸裂开,四处飞溅的果壳碎片杀伤力非常强,像一颗颗小手榴弹。所以,在炸弹树果实成