大豆疫霉拮抗菌株的筛选、鉴定及拮抗作用

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大豆疫霉Phytophthora sojae是农业生产上极为重要的植物病原菌之一,由其引起的大豆疫病是大豆生产上的毁灭性病害之一。筛选具有生防潜力的大豆疫霉拮抗菌,可以为寻找病害措施和设计新的疫病控制策略提供基础。本学位论文在大豆疫霉拮抗微生物筛选的基础上,对2株拮抗效果较好的细菌菌株BY-2、BZ-2进行了鉴定,并对其离体及活体拮抗作用以及促生长作用进行了研究,主要研究结果如下:1、采用平板对峙法和杯碟法分别对本实验室保存的哈茨木霉(Trichodermaharziarum)TH-1菌株及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS菌株以及6株粉红单端孢(Trichothecium roseum)菌株进行了平板抑菌作用及代谢产物活性测定,结果表明,它们对大豆疫霉的拮抗效果均不显著。2、从安徽省大豆疫病田采集的大豆根际土壤中分离得到4株大豆疫霉拮抗细菌,平板对峙试验显示,其中拮抗细菌菌株BY-2和BZ-2在第5d时对大豆疫霉的平板抑制效果分别为79.0%和63.97%。对菌株BY-2、BZ-2进行了鉴定。经形态观察、生理生化特性测定、扫描电镜观察及16S rDNA、gyrB序列分析,鉴定上述两菌株均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。3、测定了不同时间的BY-2代谢液对大豆疫霉的抑制活性,结果显示,72h代谢液对供试病原菌的菌丝生长抑制效果最好;BY-272h代谢液对供试病原菌AH19的抑制效果显著高于其他各菌株,抑制效果达到40.93%。BY-2菌株72h代谢滤液能显著抑制游动孢子萌发,培养滤液处理24h后孢子萌发抑制率为57.71%,且24h后孢子萌发抑制率显著高于其他各处理。4、采用培养皿对扣法,测定了BY-2菌株挥发物对大豆疫霉的抑制活性。结果表明,BY-2挥发物处理对供试大豆疫霉菌株的菌丝生长均有显著的抑制作用,但抑制率随菌株和处理时间不同而有显著差异,其中对菌株AH19处理第7d时的抑制率最高,为91.94%。5、对筛选获得的生防菌株进行了盆栽试验测定,结果显示菌株BY-2提前3d浸根接种对大豆疫病的防效显著高于各处理,接种10d后调查防效为75.01%;BY-2菌液处理同时还可显著地促进大豆幼苗的生长;处理的鲜重干重都显著地高于对照,分别增加了63.16%、43.48%,根长和茎长也都显著高于对照,分别比对照增加56.57%、6.95%。6、研究了温度、pH、接种量和培养时间对菌株BY-2的影响,结果表明,菌株BY-2最适生长温度为30℃,最适pH为7.0,最适接种量为2%,最适培养时间为48h,为下一步生防菌剂的开发提供依据。
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