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目的:研究黄曲霉诱导子((Aspergilus flavuus fungal elicitor)对长春花干细胞(cambial meristematic cells,CMCs)中萜类吲哚生物碱(terpenoid indole alkaloids,TIA)生物合成的诱导作用及调控机理。方法:(1)制备黄曲霉诱导子:培养黄曲霉后,分离菌丝体与培养基,并分别用蒸馏水制备成一定浓度的黄曲霉诱导子。(2)测定黄曲霉真菌诱导子对长春花悬浮CMCs生物碱含量的影响:在长春花悬浮CMCs预培养4d和6d后,添加真菌诱导子,并使诱导子终浓度为5、15、25 mg/L,诱导处理12、24、36、48、60 h后采收,利用HPLC-PDA法测定文多灵、长春质碱、阿吗碱含量,获得最优诱导条件。(3)在最优诱导条件下,分析黄曲霉诱导子对长春花CMCs转录组的影响。(4)构建pCRISPR/Cas9-ORCA3基因敲除载体,转化农杆菌EHA105后侵染长春花CMCs,经筛选培养获得ORCA3基因缺陷型长春花CMCs。(5)在最优诱导条件下,利用qRT-PCR法检测ORCA3等TIA生物合成相关基因的表达情况,探讨黄曲霉诱导子诱导长春花TIA生物合成的调控机理。结果:(1)最优的黄曲霉诱导子处理条件为:在长春花悬浮CMCs预培养6 d后,投入黄曲霉菌丝体诱导子25 mg/L,并诱导48 h。在此条件下,文多灵、长春质碱和阿吗碱含量分别高达8.79、2.81和8.95 mg/L,是对照组的1.45、3.29和2.14倍。(2)转录组结果表明D4H、G10H、GES、IRS、LAMT、SGD、STR、TDC和ORCA3参与了该诱导过程的调控。(3)qRT-PCR结果表明,黄曲霉诱导子是通过上调ORCA3的转录水平,来提高TIA生物合成相关基因的表达量,进而促进长春花CMCs中文多灵、长春质碱和阿吗碱的积累。结论:黄曲霉菌丝体诱导子能促进长春花CMCs中TIA的生物合成,其调控机理与上调ORCA3的表达量有关。